C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) A61K 45/08 (2006.01) C07K 14/51 (2006.01) C07K 14/71 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/566 (2006.01) G01N 33/567 (2006.01)
Patent
CA 2222562
This invention relates to a method for identifying a receptor agonist or antagonist by providing a nucleic acid encoding a receptor having a first TAF region able to activate transcription from a promotor, and a second TAF region mutated to have the functional context of the second TAF region, but not able on its own to activate transcription of the promoter. The nucleic acid is provided within a cell unable to exhibit transcription from the promoter in the presence of the second TAF region alone, but able to exhibit transcription from the promoter in the presence of the first TAF region. The cell further includes a reporter construct containing the promoter operatively linked to a reporter gene. The reporter gene is transcribed when the promoter is activated in the presence of the first TAF region. The method further includes contacting the cell with a potential agonist or antagonist, under conditions in which contact of the cell with a known agonist or antagonist of the receptor increases or decreases transcription from the promoter and the level of the product of the reporter construct. Finally, the method involves measuring the level of increase of the product of the reporter construct as an indication of the agonist activity of the potential agonist. The method is applicable to intracellular receptors including ER, AR, PR and GR.
L'invention concerne un procédé pour identifier un agoniste ou un antagoniste d'un récepteur en utilisant un acide nucléique codant pour un récepteur ayant une première région TAF capable d'activer la transcription depuis un promoteur et une seconde région TAF mutée pour avoir le contexte fonctionnel de la seconde région TAF, mais incapable toute seule d'activer la transcription du promoteur. L'acide nucléique se trouve dans une cellule incapable d'assurer la transcription depuis le promoteur en présence de la seule seconde région TAF, mais il peut assurer la transcription depuis le promoteur en présence de la première région TAF. La cellule contient, en outre, un reporter de recombinaison contenant le promoteur lié d'une manière opérationnelle au gène reporter. Le gène reporter est transcrit quand le promoteur est activé en présence de la première région TAF. Le procédé consiste, en outre, à mettre la cellule en contact avec un agoniste ou un antagoniste potentiel, dans des conditions où le contact de la cellule avec un agoniste ou un antagoniste connu du récepteur augmente ou diminue la transcription depuis le promoteur et le niveau du produit du reporter de recombinaison. Finalement, le procédé consiste à mesurer le niveau d'augmentation du produit du reporter de recombinaison pour avoir une indication de l'activité de l'agoniste potentiel. Le procédé est applicable à des récepteurs intracellulaires tels que ER, AR, PR et GR.
Delorme Evelyn
Gleeson Martin A.g.
Mcdonnell Donald P.
Miner Jeffrey N.
Pike J. Wesley
Ligand Pharmaceuticals Incorporated
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1701130