C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/79 (2006.01) C12N 9/72 (2006.01) C12N 15/64 (2006.01) C12N 15/67 (2006.01) C12N 15/85 (2006.01)
Patent
CA 2195303
A method for selecting recombinant host cells expressing high levels of a desired protein is described. This method utilizes eukaryotic host cells harboring a DNA construct comprising a selectable gene (preferably an amplifiable gene) and a product gene provided 3' to the selectable gene. The selectable gene is positioned within an intron defined by a splice donor site and a splice acceptor site and the selectable gene and product gene are under the transcriptional control of a single transcriptional regulatory region. The splice donor site is generally an efficient splice donor site and thereby regulates expression of the product gene using the transcriptional regulatory region. The transfected cells are cultured so as to express the gene encoding the product in a selective medium comprising an amplifying agent for sufficient time to allow amplification to occur, whereupon either the desired product is recovered or cells having multiple copies of the product gene are identified.
Procédé de sélection de cellules hôtes recombinantes exprimant des niveaux élevés d'une protéine souhaitée. Ce procédé utilise des cellules hôtes eucaryotes comportant un produit de recombinaison d'ADN comprenant un gène sélectionnable (de préférence, un gène amplifiable) et un gène de produit à 3' par rapport au gène sélectionnable. Celui-ci est positionné à l'intérieur d'un intron défini par un site donneur d'épissage et par un site accepteur d'épissage et le gène sélectionnable, ainsi que le gène de produit, se trouvent sous le contrôle de transcription d'une région unique de régulation de transcription. Le site donneur d'épissage est généralement un site donneur d'épissage efficace et, de ce fait, il régule l'expression du gène de produit au moyen de la région de régulation de transcription. Les cellules transfectées sont cultivées, de manière à exprimer le gène codant le produit, dans un milieu sélectif comprenant un agent d'amplification, pendant une durée suffisante pour permettre l'apparition de l'amplification, puis le produit souhaité est récupéré ou bien les cellules possédant des copies multiples du gène de produit sont identifiées.
Dennison Associates
Genentech Inc.
LandOfFree
Method for selecting high-expressing host cells does not yet have a rating. At this time, there are no reviews or comments for this patent.
If you have personal experience with Method for selecting high-expressing host cells, we encourage you to share that experience with our LandOfFree.com community. Your opinion is very important and Method for selecting high-expressing host cells will most certainly appreciate the feedback.
Profile ID: LFCA-PAI-O-1569478