C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 9/96 (2006.01) C07K 1/06 (2006.01) C07K 1/10 (2006.01) C12N 9/00 (2006.01) C12N 9/04 (2006.01) C12N 9/16 (2006.01) C12N 11/00 (2006.01) C12N 11/02 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01) G01N 33/535 (2006.01) G01N 33/543 (2006.01)
Patent
CA 2463862
The present invention provides a simple and efficient method of preparing an analyte-enzyme conjugate where the enzyme contains free, surface-accessible carboxyl moieties without generating undesired, cross-linked enzymes, while preserving the functionality of the enzyme. The method involves treating an enzyme with a blocking agent such that the free carboxyl moieties become non- reactive prior to the conjugation reaction with the desired analyte. The yield of the analyte-enzyme conjugate and the purity of the conjugates formed are high since cross-linking of the blocked enzymes is minimized or prevented. The invention is generally useful in preparing any conjugates of an analyte of interest and an enzyme containing surface accessible carboxyl moieties. The invention is particularly useful in preparing conjugates of any analyte of interest and horseradish peroxidase, alkaline phosphatase or acetylcholine esterase. The conjugates prepared according to the invention are useful in a variety of assays including but not limited to enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), immunohistochemistry, and the like. The invention is further directed to analyte-enzyme conjugates prepared by the inventive method and to kits which contain an analyte-enzyme conjugate prepared by the methods herein for the detection and/or quantitation of an analyte in a sample.
L'invention concerne un procédé simple et efficace de préparation d'un conjugué analyte-enzyme, l'enzyme contenant des groupes carboxyle libres, accessibles en surface sans produire d'enzymes non souhaitées, réticulées, tout en préservant la fonctionnalité de ladite enzyme. Le procédé implique le traitement de l'enzyme par un agent bloquant de sorte que les groupes carboxyle libres deviennent non réactifs avant la réaction de conjugaison avec l'analyte souhaité. Le rendement du conjugué analyte-enzyme et la pureté desdits conjugués formés sont élevés, étant donné que la réticulation des enzymes bloquées est minimisée ou évitée. L'invention est généralement utile dans la préparation de conjugués d'un analyte d'intérêt et d'une enzyme contenant des groupes carboxyle accessibles en surface. L'invention est utile en particulier dans la préparation de conjugués d'analyte d'intérêt et la peroxydase du raifort, la phosphatase alcaline ou l'acétylcholine estérase. Lesdits conjugués préparés selon l'invention sont utiles dans une pluralité d'essais entre autres, un essai immunoabsorbant lié à un enzyme (ELISA), l'immunocytochimie, etc. L'invention concerne également des conjugués analytes-enzymes préparés selon ledit procédé ainsi que des kits qui contiennent un conjugué analyte-enzyme préparés selon les procédés pour détecter et/ou analyser quantitativement un analyte dans un échantillon.
Lombardi Vincent C.
Schooley David A.
Oyen Wiggs Green & Mutala Llp
The Board Of Regents Of The Nevada System Of Higher Education On Reno
The Board Of Regents Of The University And Community College Sys
LandOfFree
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