Method for sequencing of nucleic acid polymers

Details Method for sequencing of nucleic acid polymers Method for sequencing of nucleic acid polymers

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01) B01L 7/00 (2006.01) C12Q 1/70 (2006.01) G01N 35/00 (2006.01)

Patent

CA 2252588

Sequencing of a selected region of a target nucleic acid polymer in a natural abundance DNA sample can be performed in a single vessel by combining the sample with a sequencing mixture containing a primer pair, a thermally stable polymerase such as ThermoSequenaseTM which incorporates dideoxynucleotides into an extending nucleic acid polymer at a rate which is no less than about 0.4 times the rate of incorporation of deoxynucleotides, nucleotide feedstocks, and a chain terminating nucleotide. The mixture is processed through multiple thermal cycles for annealing, extension and denaturation to produce a product mixture which is analyzed by electrophoresis.

Il est possible de réaliser le séquençage d'une région sélectionnée d'un polymère cible d'acide nucléique dans un échantillon d'ADN naturellement abondant, dans un seul récipient en combinant l'échantillon avec un mélange de séquençage renfermant une paire d'amorces, une polymérase thermiquement stable telle que la ThermoSéquénase?TM¿ qui contient des didésoxynucléotides dans un polymère d'extension d'acide nucléique, à une vitesse qui n'est pas inférieure à environ 0,4 fois la vitesse d'incorporation des désoxynucléotides, de charges nucléotidiques et d'un nucléotide terminant une chaîne. Le traitement de ce mélange s'effectue au cours de plusieurs cycles thermiques comprenant les phases de recuit, d'extension et de dénaturation afin d'obtenir un mélange de produits qui est analysé par électrophorèse.

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