C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)
Patent
CA 2333254
An improved method for the simultaneous sequence-specific identification of mRNAs in a mRNA population allows the visualization of nearly every mRNA expressed by a tissue as a distinct band on a gel whose intensity corresponds roughly to the concentration of the mRNA. In general, the method comprises the formation of cDNA using anchor primers to fix a 3'-endpoint, producing cloned inserts from the cDNA in a vector containing a bacteriophage-specific promoter for subsequent RNA synthesis, generating linearized fragments of the cloned inserts, preparing cRNA, transcribing cDNA from the cRNA using a set of primers, and performing PCR using a 3'-rprimer whose sequence is derived from the vector and a set of 5'-primers that is derived from the primers used for transcription of cDNA from cRNA. The method can identify changes in expression of mRNA associated with the administration of drugs or with physiological or pathological conditions.
L'invention concerne un procédé amélioré destiné à l'identification simultanée spécifique aux séquences des ARN messagers dans une population d'ARNm, qui permet de visualiser pratiquement chaque ARNm exprimé par un tissu sous la forme d'une bandelette distincte sur un gel dont l'intensité correspond à peu près à la concentration d'ARNm. D'une manière générale, le procédé comprend la formation d'ADNc au moyen d'amorces d'ancrage servant à fixer l'extrémité 3'; la production d'inserts clonés à partir d'ADNc dans un vecteur comprenant un promoteur spécifique aux bactériophages à des fins de synthèse ultérieure d'ARN; la génération de fragments linéarisés des inserts clonés; la préparation d'ARNc; la transcription d'ADNc à partir des ARNc au moyen d'un ensemble d'amorces et; la réalisation d'une réaction PCR au moyen d'une amorce 3' dont la séquence est dérivée à partir du vecteur ainsi que d'un ensemble d'amorces 5' qui est dérivé des amorces utilisées pour la transcription d'ADNc à partir des ARNc. Le procédé permet d'identifier les changements dans l'expression d'ARNm associés à l'administration de médicaments ou à des états physiologiques ou pathologiques.
Erlander Mark G.
Hasel Karl W.
Sutcliffe J. Gregor
Fetherstonhaugh & Co.
The Scripps Research Institute
LandOfFree
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