C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C07H 21/00 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)
Patent
CA 2174966
An improved method for the simultaneous sequence-specific identification of mRNAs m an mRNA population allows the visualization of nearly every mRNA expressed by a tissue as a distinct band on a gel whose intensity corresponds roughly to the concentration of the mRNA. In general, the method comprises the formation of cDNA using anchor primers to fix a 3'-endpoint, producing cloned inserts from the cDNA in a vector containing a bacteriophage-specific promoter for subsequent RNA synthesis, generating linearized fragments of the cloned inserts, preparing cRNA, transcribing cDNA from the cRNA using a set of primers, and performing PCR using a 3'-primer whose sequence is derived from the vector and a set of 5'-primers that is derived from the primers used for transcription of cDNA from cRNA. The method can identify changes in expression of mRNA associated with the administration of drugs or with physiological or pathological conditions.
Un procédé amélioré pour l'identification simultanée spécifique des séquences des ARNm dans une population d'ARNm permet la visualisation de presque tous les ARNm exprimés par un tissu sous la forme de bandes distinctes sur un gel, l'intensité de ces bandes correspondant approximativement à la concentration de chaque ARNm. En règle générale, ce procédé comprend la formation d'ADNc à l'aide d'amorces d'ancrage destinées à la fixation d'une terminaison 3', la production d'inserts clonés à partir de l'ADNc dans un vecteur contenant un promoteur spécifique des bactériophages pour la synthèse ultérieure de l'ARN, la génération de fragments linéarisés des inserts clonés, la préparation de l'ARNc, la transcription de l'ADNc à partir de l'ARNc à l'aide d'une série d'amorces, et la réalisation de la réaction en chaîne de la polymérase à l'aide d'une amorce 3' dont la séquence est dérivée du vecteur et d'une série d'amorces 5' dérivée des amorces utilisées pour la transcription de l'ADNc à partir de l'ARNc. Ce procédé permet d'identifier les modifications de l'expression des ARNm associées à l'administration de médicaments ou à des états physiologiques ou pathologiques.
Erlander Mark G.
Sutcliffe J. Gregor
Fetherstonhaugh & Co.
Scripps Research Institute (the)
The Scripps Research Institute
LandOfFree
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