C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2427474
A method for the amplification of a template nucleic acid comprises simultaneously carrying out the steps of reacting a nucleic acid primer with said template nucleic acid, normal DNA precursor nucleotides, at least one modified DNA precursor nucleotide and a DNA polymerase so as to obtain an extended nucleic acid primer, said nucleic acid primer remaining bound to said template; cleaving the modified base-containing extended nucleic acid primer so as to generate a free 3'-OH terminus that is extensible by said DNA polymerase; and repeating steps i) and ii) on DNA fragments thereby generated. The modified precursor nucleotide may be a substrate for a DNA glycosylase or recognised by a 3'-endonulcease and determines the cleavage of the DNA and the site of the cleavage accordingly. The method has significant advantages over existing technologies in that it is more versatile and more flexible with respect to providing a single high throughput process that can be easily adapted to multiple different formats in the fields of DNA detection, quantitation and characterisation.
L'invention concerne un procédé d'amplification d'acides nucléiques d'une matrice consistant à effectuer, de manière simultanée, les étapes consistant à faire réagir une amorce d'acides nucléiques avec des acides nucléiques d'une matrice, des nucléotides normaux précurseurs d'ADN, au moins un nucléotide précurseur d'ADN modifié et une polymérase ADN, de manière à obtenir une amorce d'acides nucléiques étendue, celle-ci restant liée à la matrice; à cliver l'amorce d'acides nucléiques étendue renfermant une base modifiée, de manière à générer une extrémité 3'-OH libre pouvant être étendue par la polymérase ADN; à répéter les étapes i) et ii) sur des fragments d'ADN ainsi générés. Le nucléotide précurseur modifié peut être un substrat destiné une ADN glycosylase ou reconnu par une 3'-endonulcéase et détermine le clivage de l'ADN et le site de clivage de manière conforme. Le procédé présente des avantages importants par rapport aux technologies existantes, dans le sens où il est plus polyvalent et plus souple en ce qui concerne l'élaboration d'un procédé unique à rendement élevé pouvant être facilement adapté à divers formats dans les champs de la détection, de l'analyse quantitative et de la caractérisation de l'ADN.
Collins Ruairi
Mccarthy Thomas Valentine
Kirby Eades Gale Baker
University College Cork - National University Of Ireland Cork
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1684552