C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01) A61K 38/45 (2006.01) C12N 9/10 (2006.01)
Patent
CA 2520170
The invention relates to a method for altering a protein X such as to modify the characteristics thereof by a) obtaining the mutants X* of the sequence coding for protein X, by means of aleatory mutagenesis, b) transformation of cells with a phenotype [P-] with vectors comprising the mutated nucleic acids obtained in step (a) which code for proteins X*, where P- signifies that said cells are auxotrophic for substance P, P begin the product of the action of X on the natural substrate thereof S, c) culturing said cells in a medium comprising a substrate S*, S* being an analogue of the natural substrate S of the protein X, d) selection of the cells [P-:: X*] which have survived step c) in which the proteins X* can biosynthesise the product P from the substrate S*. The invention further relates to mutated proteins X, nucleic acids, expression vectors, host cells comprising a vector, use of N-dideoxyribosyl transferases for the transfer of a dideoxyribose (ddR) from a dideoxyribonucleoside to another nucleoside, a method for production of compounds comprising a step using a mutated protein and a strain of <i>E. coli</i>.
Procédé pour faire évoluer une protéine X de sorte à en modifier ses caractéristiques par a) obtention de mutants X* de la séquence codant pour la protéine X par mutagenèse aléatoire, b) transformation de cellules comportant un phénotype [P-] avec des vecteurs comportant les acides nucléiques mutés obtenus à l~étape a) codant pour le protéines X*, P- signifiant que lesdites cellules sont auxothrophes pour la substance P, P étant le produit de l~action de X sur son substrat naturel S, c) mise en culture desdites cellules dans un milieu comprenant un substrat S*, S* étant un analogue du substrat naturel S de la protéine X, d) sélection des cellules [P-:: X*] qui ont survécu à l~étape c) dans lesquelles les protéines X* sont capables de réaliser la biosynthèse du produit P à partir du substrat S*, protéines X mutées, acides nucléiques, vecteurs d~expression, cellules hôtes comprenant un vecteur, utilisation de N-didéoxyribosyltransférases pour le transfert d~un didéoxyribose (ddR) d~un didéoxyribonucléoside sur un autre nulcéoside, procédé de préparation de composés comprenant une étape consistant à mettre en .oelig.uvre une protéine mutée, et une souche d~E. coli.
Kaminski Pierre-Alexandre
Marliere Philippe
Centre National de La Recherche Scientifique (cnrs)
Institut Pasteur
Robic
LandOfFree
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