C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/66 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)
Patent
CA 2502431
The present invention is related to a method for the manufacture of a nucleic acid molecule comprising the steps of a) providing a first at least partially double-stranded oligonucleotide which has a modification allowing the oligonucleotide to be coupled to a surface, whereby the oligonucleotide comprises a recognition site for a first type IIS restriction enzyme which cuts outside its recognition site, and which oligonucleotide comprises a single-stranded overhang, b) providing a second at least partially double- stranded oligonucleotide whereby the oligonucleotide comprises a recognition site or a part thereof or a sequence which is complementary thereto, for a second type IIS restriction enzyme which cuts outside its recognition site, and which second oligonucleotide comprises a singlestranded overhang, c) ligating the first and the second oligonucleotide via their overhangs generating a first ligation product, d) immobilising the first ligation product to the surface via the modification, e) cutting the immobilised ligation product with the first type IIS restriction enzyme thus releasing an elongated oligonucleotide having an overhang, f) combining the elongated oligonucleotide with a further at least partially double~ stranded oligonucleotide which has a modification allowing the oligonucleotide to be coupled, to a surface, whereby the further oligonucleotide comprises a recognition site for a further type IIS restriction enzyme which cuts outside its recognition site and which oligonucleotide comprises a single-stranded overhang, and ligating the elongated second oligonucleotide and the further at least partially double-stranded oligonucleotide via their overhangs forming a further ligation product, g) immobilising the further ligation product to a surface via the modification, h) cutting the further ligation product with the further type Iis restriction enzyme releasing an elongated oligonucleotide having an overhang, and i) optionally, repeating steps f) to h).
La présente invention concerne une méthode de fabrication d'une molécule d'acide nucléique comprenant les étapes consistant : a) à utiliser un premier oligonucléotide au moins partiellement bicaténaire qui présente une modification permettant audit oligonucléotide d'être accouplé à une surface, ledit oligonucléotide comprenant un site de reconnaissance d'une enzyme de restriction de type IIS qui se clive à l'extérieur de son site de reconnaissance, ledit oligonucléotide comprenant une extrémité protubérante monocaténaire, b) à utiliser un second oligonucléotide au moins partiellement bicaténaire, ledit oligonucléotide comprenant un site de reconnaissance, ou une partie de ce dernier ou une séquence qui est complémentaire de ce dernier, d'une enzyme de restriction d'un second type IIS qui se clive à l'extérieur de son site de reconnaissance, ledit second oligonucléotide comprenant une extrémité protubérante monocaténaire, c) à ligaturer le premier et le second oligonucléotide par l'intermédiaire de leurs extrémités protubérantes afin de générer un premier produit de ligature, d) à immobiliser le premier produit de ligature sur la surface par l'intermédiaire de la modification, e) à découper le produit de ligature immobilisé présentant la première enzyme de restriction de type IIS de manière à ainsi libérer un oligonucléotide allongé présentant une extrémité protubérante, f) à combiner l'oligonucléotide allongé avec un autre oligonucléotide au moins partiellement bicaténaire qui présente une modification permettant à l'oligonucléotide d'être accouplé, sur une surface, l'autre oligonucléotide comprenant un site de reconnaissance d'une autre enzyme de restriction de type IIS qui se clive à l'extérieur de son site de reconnaissance, ledit oligonucléotide comprenant une extrémité protubérante monocaténaire, et à ligaturer le second oligonucléotide allongé et l'autre oligonucléotide au moins partiellement bicaténaire par l'intermédiaire de leurs extrémités protubérantes de manière à former un autre produit de ligature, g) à immobiliser l'autre produit de ligature sur une surface par l'intermédiaire de la modification, h) à découper l'autre produit de ligature présentant l'autre enzyme de restriction de type IIS de manière à ainsi libérer un oligonucléotide allongé présentant une extrémité protubérante, et i) éventuellement, à répéter les étapes f) à h).
O'connell Timothy
Schatz Octavian
Schwer Heinz
Waldmann Thomas
Borden Ladner Gervais Llp
Sloning Biotechnology Gmbh
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1562317