C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01)
Patent
CA 2620881
The invention relates to a method for stripping undesired nucleic acid components from double-stranded DNA, in particular, super-coiled plasmid DNA. The method is characterised by the steps: (a) provision of a mixture containing completely and/or partly double-stranded nucleic acids and optionally single-stranded nucleic acids, (b) resuspension of the mixture from (a) in an aqueous, low-concentration buffer system with low ion strength and low buffer effect, (c) adjustment of the conditions in the mixture from (b), to those where the completely and/or partly double-stranded nucleic acids are denatured, (d) further addition of buffer and a polymer component to the mixture from (c), (e) incubation of the mixture from (d) for a time which is sufficient for the formation of an aqueous two-phase system with an upper and lower phase and (f) removal of the upper phase containing the single-strand nucleic acids and isolation of the double-strand nucleic acids from the lower phase.
L'invention concerne un procédé d'enrichissement de constituants d'acides nucléiques indésirables de l'ADN double brin, notamment de l'ADN plasmide super-hélicoïdal. Le procédé selon l'invention consiste (a) à prendre un mélange contenant des acides nucléiques entièrement et/ou partiellement à double brin ainsi que des acides nucléiques à brin unique; (b) à faire tenir en suspension le mélange cité en (a) dans un système tampon aqueux à faible poids molaire ayant une faible force ionique et une faible action tampon; (c) à régler les conditions dans le mélange selon (b) pour lesquelles les acides nucléiques entièrement et/ou partiellement à double brin sont dénaturés; (d) à ajouter à nouveau du système tampon et une composante polymère au mélange selon (c); (e) à faire incuber le mélange selon (d) pendant une période suffisante pour la formation d'un système aqueux à deux phases contenant une phase supérieure et une phase inférieure; et (f) à éloigner la phase supérieure contenant l'acide nucléique à brin unique et à recueillir l'acide nucléique double brin issu de la phase inférieure.
Frerix Andreas
Hubbuch Juergen
Kula Maria-Regina
Mueller Markus
Qiagen Gmbh
Smart & Biggar
LandOfFree
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