C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/81 (2006.01)
Patent
CA 2714042
The invention relates to a method for the targeted integration of at least three copies of a gene of interest into the genome of a Yarrowia strain, that includes the steps of: (a) cultivating a Yarrowia strain, said strain including a deletion among at least three genes, the phenotype associated with each of said deletions corresponding to an auxotrophy or a dominant character for said strain; (b) converting the Yarrowia strain thus obtained using at least three recombinant vectors including selection markers enabling, for said Yarrowia strain, the complementation of auxotrophy and, potentially, the dominant character resulting from each of said deletions; and (c) selecting, on a minimum medium, yeasts having integrated said at least three recombinant vectors. The invention also relates to a method for producing a polypeptide of interest using said method, and to a method for obtaining a modified Yarrowia strain including a deletion among at least three genes, the phenotype associated with each of said deletions corresponding to an auxotrophy or a dominant character for said strain.
La présente invention concerne un procédé d'intégration ciblée d'au moins trois copies d'un gène d'intérêt dans le génomed'une souche de Yarrowia comprenant les étapes de : (a) mise en culture d'une souche de Yarrowia, laquelle souche comprend une délétion parmi au moins trois gènes, le phénotype associé à chacune de ces délétions correspondant à une auxotrophie ou à un caractère dominant pour ladite souche; (b) transformation de ladite souche de Yarrowia ainsi obtenue avec au moins trois vecteurs recombinants qui comprennent des marqueurs de sélection permettant, pour ladite souche de Yarrowia, la complémentation de l'auxotrophie et, le cas échéant, du caractère dominant résultant de chacune desdites délétions; et (c) sélection sur un milieu minimal, des levures ayant intégré lesdits au moins trois vecteurs recombinants. La présente invention comprend également un procédé de production de polypeptide d'intérêt mettant en oeuvre un tel procédé ainsi qu'un procédé d'obtention de souche de Yarrowia modifiée comprenant une délétion parmi au moins trois gènes, le phénotype associé à chacune de ces délétions correspondant à une auxotrophie ou à un caractére dominant pour ladite souche.
Beckerich Jean-Marie
Fudalej Franck
Neuveglise Cecile
Nicaud Jean-Marc
Institut National de La Recherche Agronomique
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2019840