Method for using unequal primer concentrations for...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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C12Q 1/68 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)

Patent

CA 2332518

The method provided herein is a method for detecting a target sequence in a test sample. Generally, the method comprises forming a reaction mixture comprising a test sample, amplification reagents, a first primer, and a second primer wherein the concentration of the first primer in the reaction mixture is 15 % to 250 % greater than the concentration of the second primer. The target sequence is amplified according to any amplification protocol that employs the primer sequences to generate copies of the target sequence that include a product from the first and second primers. A probe is hybridized to the amplification product from the first primer to form a hybrid complex; and the hybrid complex is detected as an indication of the presence of the target sequence in the test sample.

Le procédé de la présente invention est un procédé permettant de détecter une séquence cible dans un échantillon de test. Généralement, le procédé consiste à former un mélange de réaction comprenant un échantillon de test, des réactifs d'amplification, une première amorce, et une seconde amorce, la concentration de la première amorce dans le mélange de réaction étant de 15 % à 250 % supérieure à la concentration de la première amorce. Le procédé consiste ensuite à amplifier la séquence cible en respectant un protocole d'amplification utilisant les séquences de l'amorce pour produire des copies de la séquence cible incluant un produit des premières et secondes amorces. On forme un complexe hybride en prenant une sonde et en la soumettant à hybridation donnant, à partir de la première amorce, le produit d'amplification. Il ne reste plus qu'à détecter le complexe hybride qui constitue une indication de la présence de la séquence cible dans l'échantillon de test.

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