C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/09 (2006.01)
Patent
CA 2520811
A method of synthesizing a cDNA having a consecutive sequence from a nucleotide adjacent to the cap structure of mRNA which comprises: (i) the step of annealing an RNA mixture containing the mRNA having the cap structure with a double-stranded DNA primer; (ii) the step of synthesizing a first-strand cDNA from the double-stranded DNA primer with the use of a reverse transcriptase to give a ligation of an mRNA/cDNA heteroduplex with the double- stranded DNA primer; and (iii) the cyclization step of linking the 3~-end and the 5~-end of the ligation of mRNA/cDNA heteroduplex with the double-stranded DNA primer with the use of a ligase. According to this method, a full-length cDNA having a consecutive sequence from a nucleotide at the initiation point can be efficiently synthesized from a trace amount of RNA via a small number of steps.
L'invention concerne une méthode de synthèse d'un ADNc comprenant une séquence consécutive d'un nucléotide adjacent à la structure à coiffe d'un ARNm, consistant (i) à renaturer un mélange d'ARN contenant l'ARNm présentant la structure à coiffe avec une amorce d'ADN bicaténaire; (ii) à synthétiser un ADNc monocaténaire à partir de l'amorce d'ADN bicaténaire à l'aide d'une transcriptase inverse afin d'obtenir une ligature d'un hétéroduplex ARNm/ADNc avec l'amorce d'ADN bicaténaire; et (iii) à cycliser la liaison de l'extrémité 3' et de l'extrémité 5' de la ligature de l'hétéroduplex ARNm/ADNc avec l'amorce d'ADN bicaténaire à l'aide d'une ligase. Cette méthode permet de synthétiser de manière efficace un ADNc entier contenant une séquence consécutive d'un nucléotide au niveau du point d'amorçage à partir d'une trace d'ARN et ce, en quelques étapes.
Kato Seishi
Kimura Tomoko
Ohtoko Kuniyo
Hitachi High-Technologies Corporation
Hitachi Instruments Service Co. Ltd.
Japan As Represented By Director General Of National Rehabilitat
Kato Seishi
Norton Rose Or S.e.n.c.r.l. S.r.l./llp
LandOfFree
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