C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2192823
The method of the present invention relates to a rapid procedure for detecting DNA in a cell, while preserving the morphology of the nucleus for analysis. The method comprises depositing a cell onto a polymeric membrane filter wherein the DNA contained in the cell is retained on the polymeric membrane filter and is available for binding with a fluorescently labeled nucleic acid probe, incubating the polymeric membrane filter with the labeled nucleic acid probe, and detecting the labeled nucleic acid probe wherein detection of the nucleic acid probe is indicative of the presence of the DNA. There are no separate permeabilization steps needed to permit the probes to enter the cell and hybridize to the DNA. The method is simple and quick and is applicable to the sample volumes found in clinical laboratories. The method of the present invention allows for analysis with single copy sequence probes of cells sorted onto, filtered onto, grown on or settled onto polymeric membrane filters. In addition, the method allows for the hybridization of probes containing single copy or repetitive DNA sequences to metaphase chromosomes as well as to interphase nuclei on membrane filters.
Ce procédé se rapporte à une procédure rapide qui permet de détecter de l'ADN dans une cellule, tout en préservant la morphologie du noyau pour l'analyse. Ce procédé consiste à déposer une cellule sur un filtre à membrane polymère, où l'ADN contenu dans la cellule est retenu sur le filtre à membrane polymère et est disponible pour se lier à une sonde à acide nucléique à marquage fluorescent, à incuber ce filtre à membrane polymère avec la sonde à acide nucléique marquée, puis à détecter cette sonde à acide nucléique marquée, la détection de cette sonde à acide nucléique fournissant une indication de la présence de l'ADN en question. Il n'est pas nécessaire de recourir à des phases de perméabilisation séparées pour permettre aux sondes de pénétrer dans la cellule et de s'hybrider à l'ADN. Un tel procédé est simple et rapide et il peut s'appliquer aux volumes d'échantillons qu'on trouve dans les laboratoires cliniques. Ce procédé permet de procéder à des analyses avec des sondes de cellules à séquence monocopie, triées, filtrées, développées ou déposées sur des filtres à membrane polymère. Ce procédé permet en outre l'hybridation de sondes contenant des séquences d'ADN monocopies ou répétitives avec des chromosomes en métaphase ainsi qu'avec des noyaux en interphase sur des filtres à membrane.
Bowe Ann E.
Klinger Katherine W.
Mahr Anna M.
Ruff-Roberts Alyson L.
Genzyme Corporation
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1665307