Method of determining the heparin content

Details Method of determining the heparin content Method of determining the heparin content

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/56 (2006.01) G01N 33/86 (2006.01)

Patent

CA 2264274

Method of determining the heparin content, which method comprises the following steps: (a) adding a known amount of thrombin (FIIa) or activated coagulation factor X (FXa) to a mixture which comprises a known concentration of chromogenic substrate (S), a known concentration of antithrombin (AT) and a sample having an unknown heparin concentration, the amount of FIIa or FXa being chosen such that at most 20 %, preferably at most 10 %, of the S present is reacted during the period which the AT needs to deactivate all the FIIa or FXa present, (b) allowing the reactions which occur to proceed and determining the final concentration of the reacted chromogenic substrate ([pNA]final) after completion of the reactions, (c) using the [pNA]final found to determine the rate constant (kdec) of the reaction of FIIa or FXa with AT, and (d) determining the heparin concentration in the sample using the value of kdec thus found from a predetermined calibration curve of kdec against heparin concentration.

L'invention concerne un procédé permettant de déterminer la formule de l'héparine. Ce procédé consiste: a) à prendre un mélange constitué de substrat chromogène (S) et d'antithrombine (AT) en concentrations connue et d'un échantillon de concentration en héparine inconnue, et à y ajouter des quantités connues de thrombine (FIIa) ou de facteur de coagulation X activé (FXa), lesquelles quantités sont choisies de façon à faire réagir au plus 20 %, de préférence au plus 10 %, du S présent pendant le temps nécessaire à l'AT pour inactiver la totalité des FIIa et/ou FXa présents; b) à laisser s'effectuer les réactions ayant lieu et à déterminer la teneur finale en substrat chromogène ayant subi la réaction ([pNA]¿final?) une fois les réactions terminées; c) à déterminer, à partir du [pNA]¿final?, la constante de vitesse (k¿dec?) de la réaction du FIIa ou de la FXa avec l'AT; et d) à déterminer la teneur de l'échantillon en héparine en utilisant une valeur k¿dec? fournie par une courbe d'étalonnage de k¿dec? par rapport à la teneur en héparine.

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