C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)
Patent
CA 2330673
The present invention relates to a novel method for analyzing nucleic acid sequences based on real-time detection of DNA polymerase-catalyzed incorporation of each of the four nucleotide bases, supplied individually and serially in a microfluidic system, to a reaction cell containing a template system comprising a DNA fragment of unknown sequence and an oligonucleotide primer. Incorporation of a nucleotide base into the template system can be detected by any of a variety of methods including but not limited to fluorescence and chemiluminescence detection. Alternatively, microcalorimetric detection of the heat generated by the incorporation of a nucleotide into the extending template system using thermopile, thermistor and refractive index measurements can be used to detect extension reactions.
La présente invention concerne un nouveau procédé d'analyse de séquences d'acides nucléiques, basé sur la détection en temps réel de l'incorporation catalysée par une ADN polymérase de chacune des quatre bases nucléotidiques fournies individuellement et successivement dans un système microfluidique, dans une cellule de réaction contenant un système de matrice comprenant un fragment d'ADN de séquence inconnue ainsi qu'une amorce oligonucléotidique. L'incorporation d'une base nucléotidique dans le système de matrice peut être détectée par l'un quelconque des nombreux procédés comprenant, sans y être limités, la détection par fluorescence ou par chimioluminescence. Dans un autre mode de réalisation, afin de détecter des réactions de développement, on peut utiliser la détection microcalorimétrique de la chaleur produite par l'incorporation d'un nucléotide dans le système de matrice, au moyen de mesures par thermopile, thermistance et indice de réfraction.
Ashton Tommy L. II
Williams Peter
Arizona Board Of Regents
Smart & Biggar
University Of Alberta
LandOfFree
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