C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)
Patent
CA 2477519
A method is disclosed for the direct synthesis of double stranded DNA molecules of a variety of sizes and with any desired sequence. The DNA molecule to be synthesis is logically broken up into smaller overlapping DNA segments. A maskless microarray synthesizer is used to make a DNA microarray on a substrate in which each element or feature of the array is populated by DNA of a one of the overlapping DNA segments. The complement of each segment is also made in the microarray. The DNA segments are released from the substrate and held under conditions favoring hybridization of DNA, under which conditions the segments will hybridize to form duplexes. The duplexes are then separated using a DNA binding agent which binds to improperly formed DNA helixes to remove errors from the set of DNA molecules. The segments can then be hybridized to each other to assemble the larger target DNA sequence.
L'invention concerne une méthode destinée à la synthèse directe de molécules d'ADN à double brins de tailles diverses avec une séquence souhaitée quelconque. Ladite molécule d'ADN destinée à la synthèse est coupée logiquement en segments d'ADN plus petits se chevauchant. Un synthétiseur de microréseaux exempt de masque est utilisé pour concevoir un microréseau d'ADN sur un substrat, sur celui-ci chaque élément ou caractéristique du réseau est peuplé par l'ADN d'un des segments d'ADN de chevauchement. Le complément de chaque segment est également élaboré dans le microréseau. Ces segments d'ADN sont libérés du substrat et maintenus dans des conditions favorisant l'hybridation de l'ADN qui permettent l'hybridation des segments pour former des duplexes. Ces duplexes sont ensuite séparés au moyen d'un agent de liaison de l'ADN qui se lie à des hélices d'ADN formées de manière inappropriée, afin d'éliminer des erreurs de la série de molécules d'ADN. Ces segments peuvent alors être hybridés l'un à l'autre pour assembler la séquence d'ADN cible la plus grande.
Belshaw Peter J.
Cerrina Francesco
Kaysen James H.
Richmond Kathryn E.
Sussman Michael R.
Gowling Lafleur Henderson Llp
Wisconsin Alumni Research Foundation
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1517286