Method of increasing protein titres

Details Method of increasing protein titres Method of increasing protein titres

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/13 (2006.01) C07K 14/505 (2006.01) C07K 16/00 (2006.01) C12N 9/72 (2006.01) C12N 15/85 (2006.01)

Patent

CA 2696809

The invention relates to methods of increasing the titre of a protein of interest in a cell as well as the improved production and purification of optimised biomolecules, one component of which is the domain CH3. A frequently observed effect in biomolecules is the cleaving of the C-terminal amino acid(s), e.g. the C-terminal lysine. The usually incomplete processing of the heavy chain of antibodies for example leads to product heterogeneity. To prevent this product heterogeneity the corresponding codon of the C--terminal lysine of the heavy antibody chain has been deleted by recombinant DNA technology. These optimised antibodies lead to a product titre which is higher than in the wild-type. In addition, they prove advantageous during purification by having better elution characteristics as a result of the reduced charge heterogeneity.

L'invention concerne des procédés d'augmentation du titre d'une protéine d'intérêt dans une cellule, et la production et le lavage améliorés de biomolécules optimisées notamment composées du domaine CH3. La séparation des acides aminés à terminaison C, par ex. de la lysine à terminaison C est un effet souvent constaté sur les biomolécules. Le traitement généralement incomplet de la chaîne lourde d'anticorps, par exemple, entraîne l'hétérogénéité du produit. Pour éviter cette hétérogénéité du produit, le codon correspondant de la lysine à terminaison C de la chaîne d'anticorps lourde à été supprimé à l'aide d'ADN de recombinaison. Ces anticorps optimisés entraînent un titre de produit augmenté par rapport au type sauvage. Ces anticorps se révèlent également avantageux dans le lavage du fait d'un meilleur comportement d'élution dû à l'hétérogénéité de charge réduite.

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