C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 7/01 (2006.01) C12N 9/50 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/57 (2006.01) C12N 15/86 (2006.01)
Patent
CA 2222686
A method for introducing a mutation into a desired site in Herpes Simplex Virus Type 1 uses a set of starting vectors, where each starting vector has a fragment of the substantially complete HSV-1 genome and also DNA which overlaps with a sequential genomic fragment contained in other starting vectors, so that upon co-transfection of a host cell, replication of viral DNA, and recombination, a mutated replicable virus is formed. The starting vector containing a gene which is to be mutated is replaced by replacement vectors. The replacement vectors contain a copy of the mutated gene and overlapping DNA, and genomic DNA which was present in the starting vector. A host cell is transformed with the replacement vectors and the remaining starting vectors under conditions allowing replication of viral DNA and recombination to form a replicating mutated virus. In preferred embodiments, the protease gene is mutated.
L'invention porte sur une méthode d'introduction d'une mutation dans un site désiré du virus Type 1 de l'herpès simplex à l'aide de vecteurs de départ dont chacun comporte un fragment de génome du HSV-1 sensiblement complet et aussi d'ADN qui recouvre un fragment génomique séquentiel contenu dans d'autres vecteurs de départ de telle manière que lors de la co-transfection d'une cellule hôte, la réplication de l'ADN viral et la recombinaison, se forme un virus muté réplicable. Le vecteur de départ contenant un gène devant être muté est remplacé par des vecteurs de remplacement. Lesdits vecteurs de remplacement contiennent une copie du gène muté et de l'ADN de recouvrement ainsi que de l'ADN génomique qui était présent dans le vecteur de départ. Une cellule hôte est transformée à l'aide des vecteurs de remplacement et des vecteurs de départ restants dans des conditions permettant la réplication de l'ADN viral et la recombinaison pour former un virus muté répliqué. Dans certaines réalisations préférées, le gène de la protéase est muté.
Register R. Bruce
Shafer Jules A.
Merck & Co. Inc.
Ogilvy Renault Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1551694