C - Chemistry – Metallurgy – 07 – H
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
07
H
C07H 21/04 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2345392
A method of detecting protein-protein interactions in a living cell comprises (a) providing a cell that contains a first heterologous conjugate and a second heterologous conjugate, wherein the first heterologous conjugate comprises a first protein of interest conjugated to a detectable group, and wherein the second heterologous conjugate comprises a second protein of interest conjugated to a protein that specifically binds to an internal structure within the cell, and then (b) detecting the presence or absence of binding of the detectable group to the internal structure, the presence of the binding indicating that the first and second proteins of interest specifically bind to one another. Additional aspects of the invention include nucleic acids encoding fusion proteins as described above, cells containing and expressing such fusion proteins, kits useful for carrying out the methods described above, and nucleic acid libraries useful as screening tools for carrying out the methods described above. The invention is usefulfor screening compounds for the ability to disrupt or inhibit the binding of known binding pairs and thereby identifying competitive inhibitors thereof. The invention is useful for screening one known protein of interest against a library of other proteins of interest to identify compounds that bind to the known protein of interest.
Un procédé de détection des interactions protéine-protéine dans une cellule vivante consiste (a) à fournir une cellule contenant un premier conjugué hétérologue ainsi qu'un second conjugué hétérologue, dans laquelle le premier conjugué hétérologue comprend une première protéine étudiée conjuguée à un groupe détectable, et le second conjugué hétérologue comprend une seconde protéine étudiée conjuguée à une protéine se liant spécifiquement à une structure interne dans la cellule, et ensuite (b) à détecter la présence ou l'absence de liaison du groupe détectable à la structure interne, la présence de la liaison indiquant que les première et seconde protéines étudiées se lient spécifiquement l'une à l'autre. D'autres aspects de l'invention concernent des acides nucléiques codant des protéines de fusion telles que décrit ci-dessus, des cellules contenant et exprimant ces protéines de fusion, des matériels utiles pour la mise en oeuvre des méthodes décrites ci-dessus, ainsi que des banques d'acides nucléiques utiles en tant qu'outils de criblage pour la mise en oeuvre des méthodes décrites ci-dessus. L'invention est utile pour cribler des composés présentant une capacité à interrompre ou à inhiber la liaison des paires de liaisons connues et ainsi identifier leurs inhibiteurs en concurrence. L'invention est utile pour cribler une protéine connue étudiée par rapport à une banque d'autres protéines étudiées afin d'identifier des composés se liant à la protéine étudiée connue.
Duke University
Sim & Mcburney
LandOfFree
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