Method of modifying chromosome

Details Method of modifying chromosome Method of modifying chromosome

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/09 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/89 (2006.01)

Patent

CA 2631322

It is intended to provide a widely usable method of modifying chromosome without resorting to any specific enzyme or sequence and a method of identifying a gene that is essentially required in cell proliferation. First, a selection marker gene (B) allowing negative selection is integrated into the upstream or downstream of a target DNA region (X) and then the selection marker gene (B) and the target DNA region (X) are sandwiched between duplicated sequences. It is preferable that a DNA fragment having a sequence (A~) (which is a sequence being substantially the same as a specific sequence (A) located in the downstream of the target DNA region) and the selection marker gene (B) as described above is constructed and then this DNA fragment is integrated into the upstream of the target DNA region (X). Next, homologous recombination and negative selection are conducted so that the target DNA region (X) can be easily removed from the chromosome. In the case where the chromosome contains no target DNA region (X) after the above-described treatment, it can be understood that the target DNA region (X) contains no gene that is essentially required in cell proliferation under the culture condition.

La présente invention a trait à un procédé de grande utilisation pour la modification de chromosome sans avoir recours à aucune enzyme ou séquence particulière et à un procédé pour l'identification d'un gène qui est essentiellement requis dans la prolifération cellulaire. D'abord, un gène marqueur de sélection (B) permettant la sélection négative est intégré dans un la partie amont ou aval d'une région d'ADN cible (X) et ensuite le gène marqueur de sélection et la région d'ADN sont disposés entre des séquences dupliquées. Il est préférable que le fragment d'ADN ayant une séquence (A') (qui est une séquence sensiblement identique à la séquence spécifique (A) située dans la partie aval de la région d'ADN cible ) et le gène marqueur de sélection (B) susmentionné soient construits et ensuite ce fragment d'ADN soit intégré dans la partie amont de la région d'ADN cible (X). Par la suite, une recombinaison homologue et une sélection négative sont effectuées de sorte que la région d'ADN cible (X) puisse être facilement éliminée du chromosome. Dans le cas où le chromosome ne contient pas de région d'ADN cible (X) suite au traitement susmentionné, on peut en déduire que la région d'ADN cible (X) ne contient aucun gène qui soit essentiellement requis dans la prolifération cellulaire dans la condition de culture.

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