C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2143428
A nucleic acid differentiating method is provided which involves using a primer having a detectable label introduced therein and a primer having a solid matrix - binding site introduced therein, amplifying a particular region of a target nucleic acid in a sample to thereby produce a labeled sample DNA, adding to this labeled sample DNA at least an equimolar amount of an unlabeled standard DNA to be evaluated for its sequence matching with the sample DNA, effecting competitive hybridization, and at the end of reaction, determining the label intensity of the hybridization product, for thereby determining the presence/absence of a mutant gene in the nucleic acid, the ratio of normal to mutant genes, or the sequence matching of a particular gene among a plurality of samples. An assay kit for differentiating nucleic acid by the differentiating method is also provided which includes target nucleic acid- amplifying primers comprising a primer having a detectable label introduced therein and a primer having a solid matrix - binding site introduced therein and an unlabeled DNA specimen to be evaluated for its matching with the amplified product amplified with the primers.
Méthode de discrimination des acides nucléiques par vérification de la présence ou de l'absence de gènes variants dans un acide nucléique, par examen du taux de gènes normaux par rapport aux gènes variants, ou par identification de certains gènes présents dans divers échantillons. Selon cette méthode, on amplifie une zone spécifique d'un acide nucléique cible présent dans un échantillon en faisant intervenir une réaction en chaîne de la polymérase et en utilisant une amorce portant un marqueur détectable et une amorce portant un site capable de liaison avec un porteur en phase solide, on provoque ensuite une hybridation compétitive en ajoutant, comme ADN échantillon marqueur, l'acide nucléique obtenu, et ce en quantité au moins équimolaire par rapport à un ADN standard non marqueur à identifier à l'aide de l'ADN échantillon, et l'on mesure enfin l'intensité de marquage du produit de l'hybridation. Le nécessaire d'essai pour la discrimination des acides nucléiques selon la méthode indiquée ci-dessus comprend une amorce d'amplification de l'acide nucléique cible, une amorce à marqueur détectable, une amorce portant un site capable de liaison avec un porteur en phase solide, et un ADN échantillon non marqueur à identifier à l'aide d'un gène amplifié par l'amorce d'amplification.
Matsunaga Hironari
Oka Takanori
Yamane Akio
Smart & Biggar
Wakunaga Seiyaku Kabushiki Kaisha
LandOfFree
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