Method of producing and establishing embryogenic tissue from...

A - Human Necessities – 01 – H

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Details

A01H 4/00 (2006.01) C12N 5/00 (2006.01)

Patent

CA 2516537

The invention relates to a conifer cloning method which offers the basic essentials in order to provide genetic diversity, said diversity being regarded as the opposite to cloning. The inventive method involves the production and establishment of embryogenic tissue from a wide range of genotypes of selected trees which correspond to species of the Diploxylon and Haploxylon subgenera. Said novel method comprises: the initiation of embryogenic tissue from a wide variety of genotypes, for a period of up to 5 months, of the Diploxylon subgenus; the reinitiation of more than 80 % of the polyembryogenic masses which are produced in vivo and the establishment of almost 90 % of said polyembryogenic masses; the induction of between 50 and 93 % of the embryogenic tissue from the precotyledonary embryos, said percentage being dependent on the tree selected and the quantity of seed used; and, finally, the establishment of 100 % of the genotypes that have proliferated from the Haploxylon subgenus. All of the above is obtained by exploiting the genetic survival capacity of the immature embryos from both subgenera, which enables same to proliferate in any culture medium. The inventive method is based on the principle of not exhausting said capacity in one medium, but rather maintaining the suitable, periodic stimulus when interchanging the embryogenic masses between the culture media used. The advantage of said method lies in the different components from each culture medium used which can be applied alternatively or simultaneously. The media are modified with different ratios and sources of ammonium nitrate, carbon sources and, optionally, a chemical adsorbent or a maturation promoter which are generally used for other purposes.

L'invention concerne une méthode de clonage de conifères fournissant les bases pour obtenir une diversité génétique, cette diversité génétique étant considérée comme étant l'antithèse du clonage. Cette méthode comprend la production et l'établissement d'un tissu embryonnaire avec une large gamme de génotypes appartenant aux arbres sélectionnés correspondant à des espèces des sous-genres Diploxylon et Haploxylon. Cette nouvelle méthode comprend l'initialisation d'un tissu embryogène d'une grande diversité de génotypes, allant jusqu'à 5 mois, du sous-genre Diploxylon, la réinitialisation en masses polyembryogènes produites in vivo, selon un pourcentage supérieur à 80 %, et l'établissement de près de 90 % de ces masses, l'induction de tissu embryogène dans des embryons précotylédonaires, selon un pourcentage compris entre 50 et 93 %, la valeur choisie dépendant de l'arbre sélectionné et de la quantité de graines utilisées, et, finalement, l'établissement de 100 % des génotypes ayant proliféré à partir du sous-genre Haploxylon. La méthode décrite ci-dessus repose sur l'exploitation de la capacité génétique de survie des embryons immatures provenant des deux sous-genres, qui leur permet de proliférer dans n'importe quel milieu de culture. Le principe de cette méthode consiste à ne pas épuiser cette capacité dans un milieu, mais à maintenir le stimulus approprié et périodique, lors du remplacement des masses embryogènes entre les milieux de culture utilisés. Les avantages de cette invention résident dans les différents composants de chaque milieu de culture utilisé, ces composants pouvant être appliqués alternativement ou simultanément. Les modifications dans les milieux sont le résultat d'interactions entre les différentes sources utilisées, à savoir le nitrate d'ammonium, le carbone, et éventuellement un adsorbant chimique ou un promoteur de maturation, l'utilisation de ces derniers étant généralement prévue pour d'autres applications.

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