C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/52 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C12N 9/00 (2006.01) C12N 9/12 (2006.01) C12N 15/54 (2006.01)
Patent
CA 2175590
This invention relates to a method of producing a recombinant eukaryotic heterodimeric enzyme using a prokaryotic host. The method involves constructing a first DNA vector containing DNA encoding one of the subunits of the dimeric emzyme and then constructing a second DNA vector containing DNA encoding the second subunit of the enzyme. Once the DNA vectors are constructed, they are used to transform a prokaryotic host. The transformed prokaryotic host cell is then cultured under conditions appropriate for the expression of the dimeric enzyme. For example, using the method of the present invention, the heterodimeric isoform of creating kinase CKMB can be produced. This invention further relates to a method of producing a recombinant human dimeric enzyme in an active form using a prokaryotic host, the recombinant enzyme products produced using the method of the present invention, and a transformed prokaryotic host constructed by the method of the present invention.
L'invention a pour objet un procédé de production d'une enzyme hétérodimère eucaryote recombinée, au moyen d'un hôte procaryote. Ce procédé implique la production par recombinaison d'un premier vecteur d'ADN renfermant de l'ADN codant l'une des sous-unités de l'enzyme dimère puis la production par recombinaison d'un second vecteur d'ADN renfermant de l'ADN codant la seconde sous-unité de l'enzyme. Une fois produits, les vecteurs d'ADN sont utilisés pour transformer un hôte procaryote. La cellule-hôte procaryote transformée est ensuite cultivée dans des conditions appropriées à l'expression de l'enzyme dimère. En appliquant, par exemple, le procédé selon la présente invention, il est possible de produire de la CKMB, isoforme hétérodimère de la créatine-kinase. L'invention a également pour objet un procédé de production d'une enzyme dimère humaine recombinée sous une forme active au moyen d'un hôte procaryote, ainsi que d'enzymes récombinées produites selon le procédé présenté. L'invention concerne en outre l'hôte procaryote transformé produit selon le procédé décrit.
Long Susan
Ziegler Robin J.
Genzyme Corporation
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1592514