C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01)
Patent
CA 2452396
A process for producing a template DNA for protein synthesis which involves the step of amplifying a linear double-stranded DNA by a polymerase chain reaction (PCR) with the use of a reaction solution containing a first double- stranded DNA fragment containing a sequence encoding a protein or a part thereof, a second double-stranded DNA fragment containing a sequence overlapping the 5~-terminal domain of the first DNA fragment, a third double- stranded DNA fragment containing a sequence overlapping the 3~-terminal domain of the first DNA fragment, a sense primer annealing with the 5~-terminal domain of the second DNA fragment and an antisense primer annealing with the 3~-terminal domain of the third DNA fragment, characterized in that the second DNA fragment contains a sequence controlling gene transcription and translation and the concentrations of the second DNA fragment and the third DNA fragment in the reaction solution each ranges from 5 to 2500 pmol/L. By using this process, a template DNA for expressing and purifying a protein can be efficiently prepared.
La présente invention concerne un processus de production de matrice d'ADN en vue de synthétiser une protéine. Ce processus consiste à amplifier un ADN linéaire double brin par une réaction en chaîne de la polymérase (PCR) à l'aide d'une solution de réaction contenant un premier fragment d'ADN double brin, lequel contient une séquence codante pour une protéine ou une partie de celle ci, un deuxième fragment d'ADN double brin contenant une séquence chevauchant le domaine 5'-terminal du premier fragment d'ADN, un troisième fragment d'ADN double brin contenant une séquence chevauchant le domaine 3'-terminal du premier fragment d'ADN, une amorce sens de renaturation de l'acide nucléique du domaine 5'-terminal du deuxième fragment d'ADN et une amorce antisens de renaturation de l'acide nucléique du domaine 3'-terminal du troisième fragment d'ADN. Le deuxième fragment d'ADN contient une séquence commandant la transcription et la traduction de gène et les concentrations du deuxième et du troisième fragment d'ADN dans la solution de réaction comprises chacune entre 5 et 2500 pmol/L. Par ce processus, on peut préparer efficacement une matrice d'ADN destinée à exprimer et à purifier une protéine.
Kigawa Takanori
Motoda Yoko
Yabuki Takashi
Yokoyama Shigeyuki
Riken
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1568628