C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/113 (2010.01) A61K 31/7088 (2006.01) A61K 31/7105 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 7/01 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12Q 1/02 (2006.01) C40B 30/06 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) C12N 5/071 (2010.01) C07H 21/02 (2006.01)
Patent
CA 2566575
A method of screening a candidate compound for susceptibility to biliary excretion by a hepatocyte transport protein. The method includes the steps of providing a culture of hepatocytes comprising a transport protein, the culture having at least one bile canaliculus; exposing a candidate compound to the culture; and determining an amount of candidate compound in the at least one bile canaliculus, the amount of candidate compound in the at least one bile canaliculus indicating the susceptibility of the candidate compound to biliary excretion by the transport protein. In some embodiments determining the amount of candidate compound in the bile canaliculus comprises inhibiting expression of the transport protein, measuring the amount of candidate compound in the bile canaliculus and comparing amounts of compound in the canalicules with and without inhibition of the transport protein. A difference in the amount of candidate compound in the canaliculus indicates susceptibility of the candidate compound to biliary excretion by the transport protein. In one embodiment, expression of the transport protein is inhibited through introduction of a RNA having a sequence corresponding to a coding strand of the gene encoding the transport protein into the hepatocyte. Optionally, the culture of hepatocytes is a long-term culture in a sandwich configuration. The method is particularly applicable to the screening of multiple candidate compounds in a single effort.
La présente invention se rapporte à un procédé de criblage d'un composé candidat permettant de déceler une susceptibilité à l'excrétion biliaire par une protéine de transport des hépatocytes. Ce procédé comprend les étapes consistant à se doter d'une culture d'hépatocytes comprenant une protéine de transport, ladite culture ayant au moins une canalicule biliaire; à exposer un composé candidat à cette culture; et à déterminer la quantité du composé candidat dans ledit ou lesdits canalicules biliaires, la quantité du composé candidat dans ledit ou lesdits canalicules biliaires indiquant la susceptibilité du composé candidat à l'excrétion biliaire par la protéine de transport. Dans certains modes de réalisation, la détermination de la quantité du composé candidat dans le canalicule biliaire consiste à inhiber l'expression de la protéine de transport, à mesurer la quantité du composé candidat dans le canalicule biliaire et à comparer les quantités du composé dans les canalicules avec et sans inhibition de la protéine de transport. Une différence de la quantité du composé candidat dans le canalicule indique une susceptibilité du composé candidat à l'excrétion biliaire par la protéine de transport. Dans un mode de réalisation, l'expression de la protéine de transport est inhibée au moyen de l'introduction d'un ARN ayant une séquence correspondant à un brin codant du gène codant la protéine de transport dans l'hépatocyte. Eventuellement, la culture des hépatocytes est une culture à long terme dans une configuration en sandwich. Ce procédé s'avère particulièrement adapté au criblage de multiples composés candidats en une seule fois.
Brouwer Kim L.
Tian Xianbin
Zhang Peijin
Norton Rose Or S.e.n.c.r.l.,s.r.l./llp
The University Of North Carolina At Chapel Hill
LandOfFree
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