C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2421492
The present invention provides a method of identifying a base at a target position in a sample nucleic acid sequence, said method comprising: subjecting a primer hybridised to said sample nucleic acid immediately adjacent to the target position, to a polymerase primer extension reaction in the presence of a nucleotide, whereby the nucleotide will only become incorporated if it is complementary to the base in the target position, and determining whether or not said nucleotide is incorporated by detecting whether Ppi is released, the identity of the target base being determined from the identity of any nucleotide incorporated, wherein, where said nucleotide comprises an adenine base, an .alpha.-thio triphosphate analogue of said nucleotide is used, ant the Rp isomer of said analogue and/or the degradation products of said analogue are eliminated from the polymerase reaction step.
La présente invention concerne une méthode d'identification d'une base, à une position cible, dans une séquence d'acide nucléique échantillon. La méthode consiste à soumettre une amorce hybridée audit acide nucléique échantillon immédiatement adjacent à la position cible à une réaction d'extension d'amorce de la polymérase, en présence d'un nucléotide, lequel nucléotide n'est incorporé que s'il est complémentaire de la base dans la position cible. La méthode consiste ensuite à déterminer si ledit nucléotide est incorporé ou non, par détection de la libération de Ppi, l'identité de la base cible étant déterminée à partir de l'identité d'un nucléotide incorporé. Ce nucléotide comprend une base adénine; un analogue de ?-thio triphosphate dudit nucléotide est utilisé; et l'isomère Rp dudit analogue et/ou les produits de dégradation dudit analogue sont éliminés de l'étape de réaction par polymérase.
Nyren Pal
Ronaghi Mostafa
Tallsjo Annika
Fetherstonhaugh & Co.
Pyrosequencing Ab
Qiagen Gmbh
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1819809