Method of using reduced dimensionality nmr spectroscopy for...

G - Physics – 01 – R

Patent

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G01R 33/465 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)

Patent

CA 2413071

The present invention discloses eight new redueced dimensionality (RD) triple resonance nuclear magnetic resonance (NMR) experiements for measuring chemical shift values of certain nuclei in a protein molecule. The RD 3D HA,CA,(CO),N,HN NMR experiment and the RD 3D H,C,(C-TOCSY-CO),N,HN NMR experiment are designed to yield "sequential" connectivities, while the RD 3D H.alpha..beta.,C.alpha..beta.,CO,HA NMR experiment and the RD 3D H.alpha..beta.,C.alpha..beta.,N,HN NMR experiment provide "intraresidue" connectivties. The RD 3D H,C,H-COSY NMR experiment, the RD 3D H,C,C, H-TOCSY NMR experiment, and the RD 2D H,C,H-COSY NMR experiment allow one to obtain assignments for aliphatic and aromatic side chain chemical shifts, while the RD 2D HB,CB;(CG,CD),HD NMR experiment provide information for the aromatic side chain chemical shifts. In addition, a method of conducting suites of RD triple resonance NMR experiments for high-throughput resonance assignment of proteins and identification of the location of secondary structure elements are disclosed.

Cette invention décrit huit nouvelles expériences de résonance magnétique nucléaire (RMN) à résonance triple de dimensionnalité réduite (DR) pour mesurer les valeurs de déplacement chimique de certains noyaux dans une molécule de protéine. L'expérience RMN DR3D<U>HA</U>,<U>CA</U>,(CO),N,HN et l'expérience RMN DR 3D<U>H</U>,<U>C</U>,(C-TOCSY-CO),N,HN sont conçues pour produire des connectivités "séquentielles", alors que l'expérience RMN DR 3D <U>H</U>?.alpha..beta.¿,C?.alpha..beta.¿,CO,HA et l'expérience RMN DR 3D <U>H</U>?.alpha..beta.¿,<U>C</U>?.alpha..beta.¿,N,HN fournissent des connectivités "intrarésidu". L'expérience RMN DR 3D <U>H</U>,<U>C</U>,C,H-COSY, l'expérience RMN DR 3D <U>H</U>,<U>C</U>,C,H-TOCSY et l'expérience RMN DR 2D <U>H</U>,<U>C</U>,H-COSY permettent d'obtenir des attributions pour les déplacements chimiques de chaînes latérales aliphatiques et aromatiques, alors que l'expérience RMN DR 2D <U>HB</U>,<U>CB</U>,(CG,CD),HD fournissent des informations pour les déplacements chimiques de chaînes latérales aromatiques. Cette invention concerne en outre un procédé permettant d'effectuer des séries d'expériences RMN à triple résonance DR pour l'attribution par résonance de protéines avec un fort rendement et pour l'identification de la position d'éléments de structure secondaire.

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