Method to evaluate the hiv drug sensitivity

Details Method to evaluate the hiv drug sensitivity Method to evaluate the hiv drug sensitivity

G - Physics

01

N

G01N 33/50 (2006.01) C12N 9/50 (2006.01) C12Q 1/70 (2006.01) G01N 33/569 (2006.01)

Patent

CA 2393620

A method to evaluate the sensitivity of an HIV variant from a biological sample to at least one drug able to inhibit the HIV protease is disclosed. The method comprises the steps of: a) amplifying the nucleic acid encoding the HIV protease from the biological sample, to obtain an amplified HIV protease coding sequence; b) cloning the amplified HIV protease coding sequence into a unique restriction site of a modified HIV molecular clone, wherein said modified HIV molecular clone is modified at least by deleting the protease coding sequence and by replacing it with the unique restriction site, to obtain a recombinant HIV molecular clone comprising and expressing the HIV protease coding sequence; c) introducing the recombinant HIV molecular clone comprising and expressing the HIV protease coding sequence into cultured cells, to obtain recombinant HIV transfected cells; d) measuring the level of HIV p24 antigen into the cell supernatant of the recombinant HIV transfected cells both in the presence and in the absence of the drug able to inhibit the HIV protease. The method is suitable for any HIV variant, both HIV-1 or HIV-2 variants. Diagnostic kits are also disclosed.

L'invention concerne une méthode permettant d'évaluer la sensibilité d'un variant du VIH provenant d'un échantillon biologique à au moins un médicament pouvant inhiber la protéase du VIH. Cette méthode consiste: a) à amplifier l'acide nucléique codant la protéase du VIH de l'échantillon biologique, afin d'obtenir une séquence amplifiée codant la protéase du VIH; b) à cloner cette séquence amplifiée en un site de restriction unique d'un clone moléculaire de VIH modifié, dans lequel ledit clone moléculaire est modifié au moins par la délétion de la séquence codant pour la protéase et par sa substitution avec le site de restriction unique, afin d'obtenir un clone moléculaire de VIH recombinant comprenant et exprimant la séquence codant pour la protéase du VIH; c) à introduire ledit clone moléculaire de VIH recombinant dans des cellules en culture afin d'obtenir des cellules transfectées par le VIH recombinant; d) à mesurer le niveau d'antigène p24 VIH dans le surnageant cellulaire desdites cellules transfectées, en présence et en l'absence du médicament pouvant inhiber la protéase du VIH. Cette méthode convient pour tout variant du VIH, aussi bien VIH-1 que VIH-2. L'invention concerne également des kits de diagnostic.

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