Method to measure gene expression ratio of key genes

Details Method to measure gene expression ratio of key genes Method to measure gene expression ratio of key genes

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01) C07K 16/00 (2006.01)

Patent

CA 2445099

The invention is a method to determine the amounts, in particular the relative amounts, of nucleic acids in complex biological samples by means of real-time PCR. According to the invention the biological sample is systematically diluted and each dilution is studied by real-time PCR for all genes of interest. From the dependence of the threshold cycle on dilution factor for each of the genes, the PCR efficiencies of the reactions are determined in the particular samples. Determining also the relative sensitivity of the real-time PCR assays compared, the relative amounts of two nucleic acids in complex biological samples are determined with unprecedented accuracy.

L'invention concerne un procédé permettant de déterminer les quantités, plus spécifiquement les quantités relatives, d'acides nucléiques dans des échantillons biologiques complexes à l'aide de la réaction de polymérisation en chaîne (PCR) en temps réel. Selon cette invention, l'échantillon biologique est systématiquement dilué et chaque dilution est étudiée à l'aide de la PCR en temps réel pour tous les gènes à analyser. En fonction de la dépendance du cycle seuil du facteur de dilution pour chacun des gènes, l'efficacité de PCR des réactions sont déterminées dans les échantillons spécifiques. En déterminant également la sensibilité relative des analyses PCR en temps réel comparées, les quantités relatives de deux acides nucléiques dans des échantillons biologiques complexes sont déterminées avec une précision sans précédent.

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