Method to trigger rna interference

A - Human Necessities – 01 – H

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Details

A01H 1/00 (2006.01) C07H 21/02 (2006.01) C12N 5/04 (2006.01) C12N 15/82 (2006.01)

Patent

CA 2593238

A method to generate siRNAs in vivo is described, as are constructs and compositions useful in the method. The method does not depend on the use of DNA or synthetic constructs that contain inverted duplications or dual promoters so as to form perfect or largely double-stranded RNA. Rather, the method depends on constructs that yield single-stranded RNA transcripts, and exploits endogenous or in vivo-produced miRNAs or siRNAs to initiate production of siRNAs. The miRNAs or siRNAs guide cleavage of the transcript and set the register for production of siRNAs (usually 21 nucleotides in length) encoded adjacent to the initiation cleavage site within the construct. The method results in specific formation of siRNAs of predictable size and register (phase) relative to the initiation cleavage site. The method can be used to produce specific siRNAs in vivo for inactivation or suppression of one or more target genes or other entities, such as pathogens.

La présente invention concerne un procédé permettant de générer des ARNsi in vivo, de même que des construits et des compositions convenant pour ce procédé. Ce procédé ne dépend pas de l'utilisation d'ADN ou de construits synthétiques qui contiennent des duplications inversées ou des promoteurs duaux de façon à former un ARN parfait ou en grande partie à double brin. Ce procédé dépend plutôt de construits qui produisent des transcrit d'ARN monobrin et exploite des ARNmi ou des ARNsi produits de manière endogène ou in vivo pour initier la production d'ARNsi. Ces ARNmi ou ces ARNsi guident le clivage du transcrit et fixe le registre pour la production d'ARNsi (habituellement d'une longueur de 21 nucléotides) codés à côté du site de clivage d'initiation dans ce construit. Ce procédé permet la formation spécifique d'ARNsi d'une taille et d'un registre (phase) prévisible par rapport au site de clivage d'initiation. Ce procédé peut être utilisé pour produire des ARNsi in vivo spécifiques destinés à inactiver ou supprimer un ou plusieurs gènes cible ou d'autres entités telles que des pathogènes.

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