Methods and compositions for analyzing proteins

G - Physics – 01 – N

Patent

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G01N 33/58 (2006.01) G01N 27/447 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01) G01N 33/566 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)

Patent

CA 2445053

Methods, compositions and kits are disclosed for determining one or more target polypeptides in a sample where the target polypeptides have undergone a post-translational modification. A mixture comprising the sample and a first reagent comprising a cleavage-inducing moiety and a first binding agent for a binding site on a target polypeptide is subjected to conditions under which binding of respective binding moieties occurs. The binding site is the result of post-translational modification activity involving the target polypeptide. The method may be employed to determine the target polypeptide itself. In another embodiment the presence and/or amount of the target polypeptide is related to the presence and/or amount and/or activity of an agent such as an enzyme involved in the post-translational modification of the target polypeptide. The interaction between the first binding agent and the binding site brings the cleavage-inducing moiety into close proximity to a cleavable moiety, which is associated with the polypeptide and is susceptible to cleavage only when in proximity to the cleavage-inducing moiety. In this way, an electrophoretic tag for each of the polypeptides may be released. Released electrophoretic tags are separated and the presence and/or amount of the target polypeptides are determined based on the corresponding electrophoretic tags.

L'invention porte sur des procédés, des compositions et des kits permettant de déterminer un ou plusieurs polypeptides cibles dans un échantillon, ces polypeptides cibles ayant été soumis à une modification post-translationnelle. L'invention porte sur un mélange comprenant l'échantillon et un premier réactif comprenant une fraction induisant un clivage, et un premier agent de liaison d'un site de liaison sur un polypeptide cible est soumis à des conditions dans lesquelles la liaison des fractions respectives se réalise. Le site de liaison est le résultat de l'activité de la modification post-translationnelle impliquant le polypeptide cible. Le procédé peut être utilisé pour déterminer le polypeptide cible lui-même. Selon une autre réalisation, la présence et/ou la quantité du polypeptide cible est relative à la présence et/ou la quantité et/ou l'activité d'un agent tel qu'une enzyme impliquée dans la modification post-translationnelle du polypeptide cible. L'interaction entre le premier agent de liaison et le site de liaison amène la fraction induisant le clivage tout à proximité d'une fraction de clivage qui est associée au polypeptide et qui est susceptible de se cliver uniquement lorsqu'elle est à proximité de la fraction induisant le clivage. De cette façon, une étiquette électrophorétique pour chaque polypeptide peut être libérée. Les étiquettes électrophorétiques libérées sont séparées et la présence et/ou la quantité des polypeptides cibles sont déterminées en fonction des étiquettes électrophorétiques correspondantes.

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