Methods and compositions for effecting homologous recombination

Details Methods and compositions for effecting homologous recombination Methods and compositions for effecting homologous recombination

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/10 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01) C12N 15/90 (2006.01)

Patent

CA 2407900

This invention concerns a method for effecting homologous recombination between a native nucleic acid segment in a cell and a donor nucleic acid segment introduced into the cell, which comprises: a) introducing into a cell a nucleic acid delivery system comprising: (i) an oligonucleotide third strand which comprises a base sequence capable of forming a triple helix at a binding region on one or both strands of a native nucleic acid segment, (ii) a donor nucleic acid, comprising a nucleic acid sequence sufficiently homologous to the native nucleic acid segment such that the donor sequence is capable of undergoing homologous recombination with the native sequence at the target region, (iii) an adapter segment comprising an oligonucleotide sequence able to bind at least a portion of said donor nucleic acid through Watson-Crick base pairing, the adapter segment being linked to said oligonucleotide third strand, b) allowing the oligonucleotide to bind to the native nucleic acid segment to form a triple helix nucleic acid, thereby inducing homologous recombination at the native nucleic acid segment target region; and c) allowing homologous recombination to occur between the native and donor nucleic acid segments. The method may namely be implemented for effecting gene alteration or mutation repair at a specific sequence site on a native DNA.

L'invention concerne une méthode permettant de réaliser une recombinaison homologue entre un segment d'acide nucléique natif dans une cellule et un segment d'acide nucléique donneur introduit dans le cellule. Cette méthode consiste à a) introduire dans une cellule un système de distribution d'acides nucléiques contenant (i) un troisième brin d'oligonucléotide doté d'une séquence de base pouvant former une triple hélice au niveau d'une région de liaison sur au moins un des brins d'un segment d'acide nucléique natif, (ii) un acide nucléique donneur doté d'une séquence d'acide nucléique suffisamment homologue au segment d'acide nucléique natif, de telle manière que la séquence donatrice peut subir une recombinaison homologue avec la séquence native au niveau de la région cible, (iii) un segment adaptateur doté d'une séquence d'oligonucléotide pouvant lier au moins une portion dudit acide nucléique donneur par un appariement de base de Watson-Crick, ledit segment adaptateur étant lié audit troisième brin d'oligonucléotide. Ladite méthode consiste aussi à b) permettre à l'oligonucléotide de se lier au segment d'acide nucléique natif pour former un acide nucléique à triple hélice, ce qui inclut donc une recombinaison homologue au niveau de la région cible du segment d'acide nucléique natif, et c) enfin permettre à une recombinaison homologue de se produire entre les segments d'acide nucléique donneur et natif. On peut notamment mettre en oeuvre cette méthode afin d'effectuer une altération génétique ou une réparation de mutation au niveau d'un site de séquence spécifique sur un ADN double brin.

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