C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 9/16 (2006.01) A01K 67/027 (2006.01) C12N 9/22 (2006.01) C12N 15/82 (2006.01) C12N 15/90 (2006.01)
Patent
CA 2479858
Embodiments relate to methods of generating a genetically modified cell. The methods can include providing a primary cell containing an endogenous chromosomal target DNA sequence in which it is desired to have homologous recombination occur. The methods also can include providing a zinc finger endonuclease (ZFE) that includes an endonuclease domain that cuts DNA, and a zinc finger domain that includes a plurality of zinc fingers that bind to a specific nucleotide sequence within the endogenous chromosomal target DNA in the primary cell. Further, the methods can include contacting the endogenous chromosomal target DNA sequence with the zinc finger endonuclease in the primary cell such that the zinc finger endonuclease cuts both strands of a nucleotide sequence within the endogenous chromosomal target DNA sequence in the primary cell, thereby enhancing the frequency of homologous recombination in the endogenous chromosomal target DNA sequence. The methods also include providing a nucleic acid comprising a sequence homologous to at least a portion of said endogenous chromosomal target DNA such that homologous recombination occurs between the endogenous chromosomal target DNA sequence and the nucleic acid.
La présente invention concerne des formes de réalisation de procédés de production d'une cellule génétiquement modifiée. Les procédés peuvent consister à utiliser une cellule primaire contenant une séquence d'ADN cible chromosomique endogène dans laquelle on souhaite voir se produire une recombinaison homologue. Les procédés peuvent également consister à utiliser une endonucléase à doigts de zinc (ZFE) qui comprend un domaine endonucléase qui coupe l'ADN et un domaine à doigts de zinc qui comprend une pluralité de doigts de zinc qui se lient à une séquence nucléotidique spécifique dans l'ADN cible chromosomique endogène de la cellule primaire. De plus, les procédés peuvent consister à mettre en contact la séquence d'ADN cible chromosomique endogène avec l'endonucléase à doigts de zinc dans la cellule primaire, de sorte que l'endonucléase à doigts de zinc coupe les deux brins d'une séquence nucléotidique dans la séquence d'ADN cible chromosomique endogène de la cellule cible, ceci améliorant la fréquence de la recombinaison homologue dans la séquence d'ADN cible chromosomique endogène. Les procédés consistent également à utiliser un acide nucléique comprenant une séquence homologue à au moins une partie dudit ADN cible chromosomique endogène de sorte que ladite recombinaison homologue se produise entre la séquence d'ADN cible chromosomique endogène et l'acide nucléique.
Aspland Simon Eric
Liljedahl Monika
Segal David J.
Sangamo Bioscience Inc.
Sim & Mcburney
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1525877