C - Chemistry – Metallurgy – 12 – P
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
P
C12P 19/34 (2006.01) C12N 9/22 (2006.01)
Patent
CA 2554966
Disclosed herein are methods and compositions for targeted cleavage of a genomic sequence, targeted alteration of a genomic sequence, and targeted recombination between a genomic region and an exogenous polynucleotide homologous to the genomic region. The compositions include fusion proteins comprising a cleavage domain (or cleavage half-domain) and an engineered zinc finger domain, as well as polynucleotides encoding same. Fusion proteins comprising cleavage half-domains are used in pairs, to reconstitute a functional cleavage domain. In these fusion proteins, the zinc finger domain can be N-terminal to the cleavage half-domain, or the cleavage half-domain can be N-terminal to the zinc finger domain. The availability of fusion endonucleases having these different polarities allows targeting (and thereby binding) of zinc finger endonucleases either to opposite strands of the DNA target or to the same strand of the DNA target, thereby increasing the number of possible sequences which can be targeted and cleaved by the fusion proteins.
La présente invention a trait à des procédés et des compostions de clivage ciblé d'une séquence génomique, l'altération ciblée d'une séquence génomique, et la recombinaison ciblée entre une région génomique et un polynucléotide exogène homologue à la région génomique. Les compositions comportent des protéines hybrides comprenant un domaine de clivage (ou demi-domaine de clivage) et un domaine de doigt de zinc génétiquement modifié, ainsi qu'à des polynucléotides codant pour celles-ci. Les protéines hybrides comportant les demi-domaines de clivage sont utilisées par paires, pour la reconstitution d'un domaine de clivage fonctionnel. Dans ces protéines hybrides, le domaine de doigt de zinc peut être un N-terminal pour le demi-domaine de clivage, ou le demi-domaine de clivage peut être le N-terminal du domaine de doigt de zinc. La disponibilité d'endonucléases de fusion présentant ces polarités différentes permet le ciblage (et donc la liaison) d'endonucléases de fusion de doigt de zinc soit aux brins opposés de la cible d'ADN ou au même brin de la cible d'ADN, augmentant ainsi le nombre de séquences possibles qui peuvent être ciblées et clivées par les protéines hybrides.
Miller Jeffrey C.
Zhang Lei
Gowling Lafleur Henderson Llp
Sangamo Biosciences Inc.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1853295