Methods and reagents for molecular cloning

Details Methods and reagents for molecular cloning Methods and reagents for molecular cloning

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/10 (2006.01) A01K 67/027 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 9/90 (2006.01) C12N 15/64 (2006.01) C12N 15/66 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01)

Patent

CA 2421057

The present invention provides compositions, methods, and kits for covalently linking nucleic acid molecules. The methods include a strand invasion step, and the compositions and kits are useful for performing such methods. For example, a method of covalently linking double stranded (ds) nucleic acid molecules can include contacting a first ds nucleic acid molecule, which has a topoisomerase linked to a 3' terminus of one end and has a single stranded 5' overhang at the same end, with a second ds nucleic acid molecule having a blunt end , such that the 5' overhang can hybridize to a complementary squence of the blunt end of the second nucleic acid molecule, and the topoisomerase can covalently link the ds nucleic acid molecules. The methods are simpler and more efficient than previous methods for covalently linking nucleic acid sequences, and the compositions and kits facilitate practising the methods, including methods of directionally linking two or more ds nucleic acid molecules.

L'invention porte sur des compositions, procédés et trousses permettant de créer des liaisons covalentes entre molécules d'acides nucléiques. Les procédés comportent une étape d'invasion d'un brin, et les compositions et trousses servent à la mise en oeuvre desdits procédés, et par exemple sur un procédé de création de liaisons covalentes entre molécules d'acides nucléiques double brin pouvant consister à mettre en contact une première molécule d'acide nucléique présentant une topoisomérase fixée au terminus 3' d'une de ses extrémités, et un porte-à-faux monobrin au terminus 5' de cette même extrémité, à une deuxième molécule d'acide nucléique à extrémité franche. Ainsi, le porte-à-faux en 5' peut s'hybrider à une séquence complémentaire de l'extrémité franche de la deuxième molécule d'acide nucléique et la topoisomérase se fixer par liaison covalente aux molécules d'acides nucléiques double brin. Lesdits procédés sont plus simples et plus efficaces que les procédés antérieurs de création de liaisons covalentes entre molécules d'acides nucléiques, tandis que les compositions et trousses facilitent l'apprentissage des procédés, y compris les procédés de fixation directionnelle d'une ou plusieurs molécules d'acide nucléique double brin.

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