G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/547 (2006.01) C07K 17/06 (2006.01) C12N 11/00 (2006.01) C12N 11/06 (2006.01) G01N 33/543 (2006.01)
Patent
CA 2293777
The present invention relates to methods for covalent immobilisation of biomolecules to carriers and membranes, wherein the presence of a His-tag is exploited, and wherein the amino acid residues that comprise said His-tag are directly involved in the covalent bond. The present invention also provides several strategies that further augment the probability of covalent immobilisation through said His-tags, such as improving the presentation of said His-tag, choosing the appropriate reaction conditions such as pH, temperature, concentration of reagent and kinetics, increasing contact between His-tag and reactive groups of said carrier or membrane, by for instance the use of IDA or anti-His antibodies or increasing the hydrophobicity of the membrane, or shielding the rest of the biomolecule from reaction by for instance increasing the hydrophobicity of said carrier or membrane or addition of substrate or competitors or blocking otherwise reactive groups, or by choosing chemical reactions that have a high selectivity for histidine residues. A carrier can also be another biomolecule. The present invention thus also relates to a method that allows covalent cross-linking between identical or different biomolecules. When such biomolecules have a natural tendency to interact with each other to form homo- or heterodimers, a strategy of increasing contact between the reactive groups (two His-tags or one His-tag and another reactive group) can be exploited. The present invention also relates to a method of providing a simultaneous and universal system for detection of biomolecules through said His-tag.
La présente invention concerne des procédés pour l'immobilisation par covalence de biomolécules sur des vecteurs et des membranes, selon lesquels on utilise la présence d'un marqueur d'histidine, et les résidus d'acides aminés qui comprennent ce marqueur d'histidine sont directement impliqués dans la liaison de covalence. La présente invention concerne aussi plusieurs stratégies qui augmentent aussi la probabilité d'une immobilisation par covalence par l'intermédiaire de ces marqueurs d'histidine. Parmi ces stratégies, on peut citer l'amélioration de la présentation de ce marqueur, la sélection des conditions de réaction appropriées comme le pH, la température, la concentration du réactif et la cinétique, l'augmentation du contact entre ce marqueur et les groupes réactifs du vecteur ou de la membrane, par exemple, en utilisant l'acide iminodiacétique ou les anticorps anti-histidine ou en augmentant l'hydrophobie de la membrane, ou en protégeant le reste de la molécule contre la réaction par exemple, en augmentant l'hydrophobie de ce vecteur ou de cette membrane ou en ajoutant un substrat ou des substances agissant par compétition ou en bloquant autrement les groupes réactifs ou en sélectionnant les réactions chimiques qui présentent une forte sélectivité pour les résidus d'histidine. Un vecteur peut être aussi une autre biomolécule. La présente invention concerne aussi un procédé qui permette la réticulation par covalence entre des biomolécules identiques ou différentes. Lorsque ces biomolécules ont une tendance naturelle à agir les unes avec les autres pour former des homo- ou des hétérodimères, il est possible de mettre en oeuvre une stratégie consistant à augmenter le contact entre les groupes réactifs (deux marqueurs d'histidine ou un marqueur d'histidine et un autre groupe réactif). La présente invention concerne un procédé pour fournir un système universel et simultané pour la détection de biomolécules à l'aide de ce marqueur.
Bosman Alfons
Van de Voorde Andre
Van Den Broeck Dirk
Van Wijnendaele Frans
Innogenetics N.v.
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1570493