C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2257152
The invention provides methods for the identification of members of a malignant lymphocyte clone by analysis of clonotypic DNA rearrangements of T cell or B cell receptor genes. The DNA or RNA from isolated single tumor cells is amplified by PCR using consensus primers to the VDJ region of the receptor genes, and the sequence of the VDJ region is obtained from each. The clonotypic sequence of the malignant clone is identified as the most frequent VDJ sequence amplified. Individual-specific PCR primers for the VDJ region are then designed based upon the clonotypic sequence. These specific PCR primers are used to detect and quantitate clonotypic cells in subsequent patient samples using in situ PCR or in situ RT-PCR. Fractionated or unfractionated samples of blood or bone marrow, as well as tissue sections can be analyzed. The methods provide a highly sensitive and quantitative means to monitor the progress of disease and the efficacy of treatment protocols, as well as to detect members of the malignant clone in autologous bone marrow cells destined for transplant.
Procédés d'identification de membres d'un clone lymphocytaire malin par analyse des réarrangements clonotypiques d'ADN de gènes de récepteurs de lymphocytes T ou B. L'ADN ou l'ARN provenant de cellules tumorales uniques isolées est amplifié par amplification en chaîne par polymérase (PCR) à l'aide d'amorces consensus de la région VDJ des gènes de récepteurs, et la séquence de la région VDJ est obtenue à chaque fois. La séquence clonotypique du clone malin est identifiée comme étant la séquence VDJ la plus fréquemment amplifiée. Des amorces de PCR, spécifiques aux individus, de la région VDJ sont ensuite conçues sur la base de la séquence clonotypique. Ces amorces de PCR spécifiques sont utilisées pour détecter et quantifier des cellules clonotypiques dans des échantillons ultérieurs provenant de patients à l'aide de la PCR ou de la PCR par transcriptase inverse in situ. Des échantillons fractionnés ou non fractionnés de sang ou de moelle osseuse, ainsi que des parties de tissus peuvent être analysés. Lesdits procédés fournissent un moyen extrêmement sensible et quantitatif de surveiller la progression de la maladie et l'efficacité de protocoles de traitement, ainsi que de détecter les membres du clone malin dans des cellules autologues de moelle osseuse destinées à la transplantation.
Belch Andrew R.
Pilarski Linda M.
Szczepek Agnieszka J.
Lomadij Inc.
Sherburne Craig K.
The Governors Of The University Of Alberta
LandOfFree
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