Methods for enhancing nucleic acid amplification

Details Methods for enhancing nucleic acid amplification Methods for enhancing nucleic acid amplification

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)

Patent

CA 2167838

A method for amplification of a nucleic acid strand in a test sample. The method includes contacting the nucleic acid strand from the test sample simultaneously with at least three oligonucleotide primers. At least one primer is a promoter-primer, and at least one other primer is complementary to the nucleic acid strand, and one other primer is complementary to a strand complementary to the nucleic acid strand. The method further includes contacting the nucleic acid strand and primers with one or more proteins having RNA-directed and/or DNA-directed DNA polymerase activities, an RNA polymerase activity, and an RNAse H activity under primer-extension conditions to allow amplification of a target region in the nucleic acid strand at essentially constant temperature.

Ce procédé d'amplification d'une chaîne d'acide nucléique concerne un échantillon d'essai. Le procédé consiste à mettre la chaîne d'acide nucléique de l'échantillon d'essai en contact simultanément avec trois amorces d'oligonucléotide. L'une au moins de ces trois amorces doit être une amorce promotrice, une autre au moins de ces trois amorces doit être complémentaire de la chaîne d'acide nucléique, et une autre au moins enfin de ces trois amorces doit être complémentaire d'une chaîne qui est elle-même complémentaire de la chaîne d'acide nucléique. Le procédé décrit consiste ensuite à mettre la chaîne d'acide nucléique et les amorces en contact avec une ou plusieurs protéines ayant une action d'ADN polymérase dirigée sur l'ARN et/ou dirigée sur l'ADN, une action d'ARN polymérase et une action de RN ase H dans des conditions d'extension d'amorce propres à amplifier une région cible de la chaîne d'acide nucléique à une température essentiellement constante.

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