C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 5/00 (2006.01) A01H 1/08 (2006.01) A01H 4/00 (2006.01) A01H 5/00 (2006.01) C12N 15/05 (2006.01) C12N 15/82 (2006.01)
Patent
CA 2342983
The present invention provides methods for generating doubled haploid and/or haploid plants from microspores. In a presently preferred embodiment of the methods of the present invention, plant material is selected that bears reproductive organs containing microspores at a developmental stage that is amenable to androgenic induction. The microspores are treated by contacting the selected plant material with water and subjecting the selected plant material to temperature stress, and optionally to nutrient stress. Preferably the selected plant material is contacted with an effective amount of a sporophytic development inducer and an effective amount of an auxin and/or cell spindle inhibiting agent. Optionally, the selected plant material is contacted with an effective amount of a cytokinin and/or an effective amount of a gibberellin. The treated microspores are isolated, preferably by density centrifugation utilizing a solution of 0.3 M mannitol layered over a higher density solution of a sugar, preferably maltose. The isolated, treated micropsores are then cultured in a liquid nutrient suspension medium supplemented with at least one plant ovary or with an aliquot of plant ovary conditioned medium, until the microspores develop into embryoids. The embryoids are transferred to a regeneration medium and incubated therein until the embryoids develop into plants. The resulting plants may be haploid or doubled haploid and may also be genetically transformed.
L'invention concerne des procédés servant à générer des plantes haploïdes et/ou des plantes haploïdes doublées à partir de microspores. Dans un mode de réalisation préféré de ces procédés, on sélectionne un matériau de plante portant des organes reproducteurs contenant des microspores à une étape de développement conduisant à une induction androgène. On traite ces microspores par mise en contact du matériau sélectionné avec de l'eau et soumission dudit matériau à une contrainte de température et éventuellement, à une contrainte nutritive. On met, de préférence, en contact le matériau sélectionné avec une quantité efficace d'un inducteur sporophytique et une quantité efficace d'une auxine et/ou d'un agent inhibant le fuseau de la cellule. On met éventuellement en contact le matériau de plante sélectionné avec une quantité efficace d'une cytokinine et/ou une quantité efficace d'une gibberelline. On isole les microspores traités, de préférence, par centrifugation par densité au moyen d'une solution de 0,3 M mannitol recouvrant une solution de densité supérieure d'un sucre, de préférence maltose. On cultive ensuite les microspores traités isolés dans un milieu liquide nutritif en suspension additionné d'au moins un ovaire de plante ou d'un aliquote de milieu conditionné d'ovaire de plante jusqu'à ce que les microspores se développent en embryoïdes. On transfère ces embryoïdes dans un milieu de régénération et on les y incube jusqu'à ce que ces embryoïdes se développent en plantes. Les plantes obtenues peuvent être des haploïdes ou des haploïdes doublés et peuvent également être transformées génétiquement.
Konzak Calvin F.
Liu Weiguo
Polle Enrique A.
Zheng Yuanming
Mbm & Co.
Northwest Plant Breeding Company
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1730199