Methods for generating highly diverse libraries

Details Methods for generating highly diverse libraries Methods for generating highly diverse libraries

C - Chemistry, Metallurgy

12

P

C12P 21/06 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/74 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)

Patent

CA 2331926

Disclosed herein is a method for generating a nucleic acid library, the method involving: (a) providing a population of single-stranded nucleic acid templates, each of the templates including a coding sequence and an operably linked promoter sequence; (b) hybridizing to the population of single-stranded nucleic acid templates a mixture of substantially complementary single- stranded nucleic acid fragments, the fragments being shorter in length than the nucleic acid template; (c) contacting each of the hybridization products of step (b) with both a DNA polymerase which lacks strand displacement activity and a DNA ligase under conditions in which the fragments act as primers for the completion of a second nucleic acid strand which is substantially complementary to the nucleic acid template; and (d) contacting the products of step (c) with RNA polymerase to generate an RNA library, the library being transcribed from the second nucleic acid strand.

L'invention concerne un procédé servant à générer une banque d'acides nucléiques et consistant à (a) mettre en application une population de gabarits d'acides nucléiques monocaténaires dont chacun comprend une séquence de codage et une séquence promoteur présentant une liaison opérationnelle ; (b) hybrider à cette population de gabarits d'acides nucléiques monocaténaires un mélange de fragments d'acides nucléiques monocaténaires pratiquement complémentaires et dont la longueur est inférieure à celle du gabarit d'acide nucléique ; (c) mettre en contact chacun des produits d'hybridation de l'étape (b) avec à la fois une ADN polymérase à laquelle manque une activité de déplacement de brin et une ADN ligase dans des conditions dans lesquelles ces fragments jouent un rôle d'amorces afin d'obtenir un deuxième brin d'acide nucléique pratiquement complémentaire du gabarit d'acide nucléique ; (d) mettre en contact les produits de l'étape (c) avec une ARN polymérase afin de générer une banque d'ARN transcrite depuis le deuxième brin d'acide nucléique.

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