Methods for generating phosphorylation site-specific...

C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K

Patent

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C07K 16/46 (2006.01) C07K 16/18 (2006.01) C07K 16/32 (2006.01) C12P 21/04 (2006.01) G01N 33/531 (2006.01)

Patent

CA 2360511

The present invention provides methods for generating phosphorylation site- specific immunological reagents. More specifically, a phosphopeptide mimetic is incorporated into a polypeptide in place of a phosphorylated amino acid. The polypeptide is used as antigen by standard methods to generate either monoclonal or polyclonal antibodies which cross-react with naturally phosphorylated polypeptide. The phosphopeptide mimetic preferably contains a non-hydrolyzable linkage from the appropriate carbon atom of the amino acid to a phosphate group. A preferred linkage is a CF2 group. Such a linkage is used to generate the phosphoserine mimetic F2Pab, which is incorporated into a polypeptide sequence derived from p53 to produce antibodies which recognize a specific phosphorylation state of p53. A CF2 group linkage is also used to produce antibodies to produce the phosphothreonine mimetic F2Pmb, and to produce the phosphotyrosine mimetic, F2Pmp.

La présente invention concerne des procédés pour générer des réactifs immunologiques spécifiques au site de phosphorylation. Elle concerne plus particulièrement un agent mimétique de phosphopeptide intégré à un polypeptide à la place d'un acide aminé phosphorylé. Le polypeptide est utilisé comme un antigène par des procédés standard pour générer des corps soit monoclonaux soit polyclonaux qui réagissent de manière croisée avec le polypeptide phosphorylé par voie naturelle. L'agent mimétique de phosphopeptide contient de préférence un lieur non hydrolysable provenant d'un atome de carbone approprié d'acide aminé à un groupe phosphate. Un groupe CF¿2? constitue un lieur préféré. Cette liaison est utilisée pour générer l'agent mimétique de phosphosérine F¿2?Pab qui est intégré à une séquence de polypeptide dérivée à partir de p53 pour produire des anticorps qui reconnaissent un état de phosphorylation spécifique à p53. On utilise également une liaison à base du groupe CF¿2? pour produire des anticorps de l'agent mimétique de phosphosérine F¿2?Pmb ainsi que l'agent mimétique de phosphotyrosine F¿2?Pmp.

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