Methods for oxidizing disulfide bonds using ozone

Details Methods for oxidizing disulfide bonds using ozone Methods for oxidizing disulfide bonds using ozone

C - Chemistry, Metallurgy

07

K

C07K 1/113 (2006.01) A61K 38/16 (2006.01) C07K 14/435 (2006.01) C07K 14/46 (2006.01) C12N 9/99 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01)

Patent

CA 2253937

A method of preparing a bioactive polypeptide in a stable, inactivated form, the method comprising the step of treating the polypeptide with ozonated water in order to oxidize and/or stabilize the cysteine residues, and in turn, prevent the formation of disulfide bridges necessary for bioactivity. The method can involve the use of ozonated water to both oxidize the disulfide bridges in a bioactive polypeptide, and to then stabilize the resultant cysteine residues. Optionally, and preferably, the method can involve the use of ozonated water to stabilize the cysteine residues, and thereby prevent the formation of disulfide bridges, in a polypeptide produced by recombinant means in a manner that allows the polypeptide to be recovered with the disulfide bridges unformed.

Ce procédé de préparation d'un polypeptide biologiquement actif sous une forme stable, inactivée consiste à traiter le polypeptide avec de l'eau ozonée afin d'oxyder et/ou de stabiliser les restes de cystéine et empêcher ainsi la formation des liaisons bisulfure nécessaires à l'activité biologique. On peut utiliser dans ce procédé de l'eau ozonée à la fois pour oxyder les liaisons bisulfure dans le polypeptide biologiquement actif et pour stabiliser ensuite les restes de cystéine résultants. De manière facultative et préférable on peut utiliser dans ce procédé de l'eau ozonée pour stabiliser les restes de cystéine et empêcher de la sorte la formation de liaisons bisulfure dans un polypeptide produit par une technique de recombinaison d'une manière qui permet de récupérer le polypeptide sans les liaisons bisulfure formées.

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