C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 9/22 (2006.01) C12N 9/02 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) C12N 15/31 (2006.01) C12N 15/52 (2006.01) C12N 15/55 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01)
Patent
CA 2271785
The present invention provides new, improved and easily manipulable methods for making nucleotide integrases. The present method also relates to a nucleotide integrase and an improved method for making RNA- protein complexes for use in preparing nucleotide integrases in vitro. The nucleotide integrase is prepared by introducing a DNA molecule which comprises a group II intron DNA sequence into a host cell. The group II intron DNA sequence is then expressed in the host cell such that RNP particles having nucleotide integrase activity are formed in the cell. Such RNP particles comprise an excised group II intron RNA encoded by the introduced DNA molecule and a group II intron-encoded protein encoded by the introduced DNA molecule. Thereafter the nucleotide integrase is isolated from the cell. In another embodiment, the nucleotide integrase is prepared by combining in vitro an excised group II intron RNA, hereafter "exogenous RNA", with group II intron-encoded protein. In another embodiment, the nucleotide integrase is prepared by combining "exogenous RNA" with an RNA-protein complex which comprises a group II intron-encoded protein.
La présente invention concerne des procédés améliorés de fabrication de nucléotide intégrases de manipulation aisée. La présente invention concerne également une nucléotide intégrase et un procédé amélioré de production de complexes ARN-protéine destinés à la préparation in vitro de nucléotide intégrases. La préparation de nucléotide intégrase consiste à introduire, dans une cellule hôte, une molécule d'ADN à intron de groupe II qui s'exprime ensuite dans la cellule hôte de manière à former dans la cellule des particules ribonucléoprotéine à activité mucléotide intégrase. De telles particules ribonucléoprotéine comprennent un ARN à intron de groupe II excisé et une protéine codée par un intron de groupe II, tous deux codés par la molécule d'ADN introduite. On isole ensuite de la cellule la nucléotide intégrase. Dans un autre mode de réalisation, on prépare la nucléotide intégrase en combinant in vitro un ARN à intron de groupe II excisé, ou "ARN exogène", avec une protéine codée par un intron de groupe II. Dans un autre mode de réalisation, on prépare la nucléotide intégrase en combinant "l'ARN exogène" avec un complexe ARN-protéine comprenant une protéine codée par un intron de groupe II.
Lambowitz Alan Marc
Matsuura Manabu
Mohr Georg
Saldanha Roland
Norton Rose Or S.e.n.c.r.l. S.r.l./llp
The Ohio State Research Foundation
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1693491