C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 1/20 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C12N 15/72 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01)
Patent
CA 2536099
The present invention provides a method for controlling the partitioning of a recombinant protein between the supernatant and the periplasm in E.coli host cell cultures wherein expression of the recombinant protein by said cells is under the control of an inducible system, which method comprises: a) providing an E.coli host cell culture b) changing the growth rate of theE.coli host cells c) inducing expression of the recombinant protein wherein steps (b) and (c) can be performed in any order or simultaneously; and subsequently d) determining the yield of recombinant protein in the culture supernatant and the E.coli host cell periplasm e) comparing the yield determined in step (d) with the yield determined when at least one other growth rate has been used in step (b) f) selecting a growth rate from the comparison made in step (e) in which the partitioning of the recombinant protein between the supernatant and the periplasm is most suited to the primary recovery of the recombinant protein.
La présente invention concerne un procédé de contrôle de la séparation d'une protéine recombinée entre le surnageant et le périplasme dans des cultures de cellules hôtes d'<i>E.coli</i> dans lesquelles l'expression de la protéine recombinée par lesdites cellules est sous le contrôle d'un système inductible, ladite méthode consistant: a) à utiliser une culture de cellules hôtes d'<i>E.coli</i>, b) à modifier le taux de croissance des cellules hôtes d'<i>E.coli</i>, c) à induire l'expression de la protéine recombinée, les étapes (b) et (c) pouvant être mises en oeuvre selon n'importe quel ordre ou simultanément; et ultérieurement, d) à déterminer le rendement d'une protéine recombinée dans le surnageant de culture et le périplasme de cellules hôtes d'<i>E.coli</i>, e) à comparer le rendement déterminé lors de l'étape (d) avec le rendement déterminé lorsqu'au moins un autre taux de croissance a été utilisé lors de l'étape (b), f) à sélectionner un taux de croissance à partir de la comparaison faite lors de l'étape (e) dans laquelle la séparation de la protéine recombinée entre le surnageant et le périplasme est plus appropriée pour la récupération primaire de la protéine recombinée.
Glover David John
Reeks Dominic Gambier
Sehdev Mukesh
Celltech R. & D. Limited
Robic
Ucb Pharma S.a.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1866832