A - Human Necessities – 61 – K
Patent
A - Human Necessities
61
K
A61K 38/17 (2006.01) A61K 39/00 (2006.01) C12Q 1/37 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01) G01N 33/569 (2006.01)
Patent
CA 2397059
We systematically investigated proteasome-mediated generation of fourteen different well-defined CTL epitopes. Synthetic peptides (26 residues) containing known CTL-epitopes flanked by their natural amino acids have been used as substrates for the 20S proteasome in vitro. After several time intervals, peptide digests were analyzed by electrospray mass spectrometry to determine the major fragments produced by the proteasome. In 12 out of 14 peptide digests, the correct C-terminal residue of the CTL-epitope was generated by proteasomal cleavage. The N-terminal residue of the epitope was generally not exactly defined by the proteasome. In most cases, fragments with the correct C-terminal residue were elongated several amino acids at the N- terminus. For two CTL-epitopes we found that their longer precursor peptides, as generated by the proteasome, correlated with efficient TAP translocation. For one CTL-epitope we found that a natural mutation directly flanking the C- terminal residue of the CTL-epitope precursor disrupted the specific C- terminal cleavage site and resulted in a non-functional cleavage product. This study indicates that proper CTL-epitope generation requires correct C-terminal cleavage by the proteasome, and allows N-terminal elongation of CTL-epitope precursor peptides.
L'invention concerne une étude systématique de la production par un protéasome de quatorze différents épitopes de lymphocytes T bien définis. Des peptides synthétiques ( 26 résidus) contenant des épitopes de lymphocytes T connus flanqués de leurs acides aminés naturels sont utilisés comme substrats pour le protéasome 20S <u> in vitro </u>. Après plusieurs intervalles, les produits de digestion des peptides sont analysés par spectrométrie de masse par électronébulisation (méthode ES-MS) afin de déterminer les fragments principaux générés par le protéasome. Dans douze produits de digestion sur quatorze, le résidu C-terminal de l'épitope susmentionné a été produit par clivage par protéasome. De manière générale, le résidu N-terminal de l'épitope n'est pas exactement défini par le protéasome. Dans la plupart des cas, des fragments présentant le bon résidu C-terminal ont été rallongés par divers acides aminés à leur N-terminus. Pour deux épitopes de lymphocytes T, on a observé que leurs peptides précurseurs les plus longs, tels qu'ils sont générés par le protéasome, correspondaient à des translocations TAP. Pour un épitope de lymphocytes T, on a observé qu'une mutation naturelle flanquant directement le résidu C-terminal du précurseur de l'épitope de lymphocytes T interrompait le site de clivage C-terminal spécifique et que l'on obtenait un produit de clivage non-fonctionnel. Cette étude a montré qu'une production appropriée d'épitope de lymphocytes T, d'une part, nécessite un bon clivage du C-terminal par le protéasome, et, d'autre part, permet d'allonger le N-terminal des peptides précurseurs des épitopes de lymphocytes T.
Kessler Johan Herman
Melief Cornelis Johannes Maria
Offringa Rienk
Ossendorp Ferry
Borden Ladner Gervais Llp
Rijksuniversiteit Te Leiden
Seed Capital Investments (sci) B.v.
LandOfFree
Methods for selecting and producing t cell peptide epitopes... does not yet have a rating. At this time, there are no reviews or comments for this patent.
If you have personal experience with Methods for selecting and producing t cell peptide epitopes..., we encourage you to share that experience with our LandOfFree.com community. Your opinion is very important and Methods for selecting and producing t cell peptide epitopes... will most certainly appreciate the feedback.
Profile ID: LFCA-PAI-O-1736794