G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/574 (2006.01) C07K 1/04 (2006.01) C12Q 1/48 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)
Patent
CA 2653760
The invention provides in a first aspect a method for the identification of an ZAP-70 interacting compound, comprising the steps of a) providing a protein preparation containing phosphorylated ZAP-70, b) contacting the protein preparation with aminopyrido-pyrimidine ligand 24 immobilized on a solid support under conditions allowing the formation of an aminopyrido-pyrimidine ligand 24 - phosphorylated ZAP-70 complex, c) incubating the aminopyrido-pyrimidine ligand 24 ~ phosphorylated ZAP-70 complex with a given compound, and d) determining whether the compound is able to separate phosphorylated ZAP-70 from the immobilized aminopyrido-pyrimidine ligand 24. In a second aspect, the present invention relates to A method for the identification of an ZAP-70 interacting compound, comprising the steps of a) providing a protein preparation containing phosphorylated ZAP-70, b) contacting the protein preparation with ligand aminopyrido-pyrimidine ligand 24 immobilized on a solid support and with a given compound under conditions allowing the formation of an aminopyrido-pyrimidine ligand 24 - phosphorylated ZAP-70 complex, and c) detecting the aminopyrido-pyrimidine ligand 24 - phosphorylated ZAP-70 complex formed in step b). hi a third aspect, the invention provides a method for the identification of an ZAP-70 interacting compound, comprising the steps of: a) providing two aliquots of a protein preparation containing phosphorylated ZAP-70, b) contacting one aliquot with aminopyrido-pyrimidine ligand 24 immobilized on a solid support under conditions allowing the formation of an aminopyrido-pyrimidine ligand 24 - phosphorylated ZAP-70 complex, c) contacting the other aliquot with aminopyrido-pyrimidine ligand 24 immobilized on a solid support and with a given compound under conditions allowing the formation of an aminopyrido-pyrimidine ligand 24 - phosphorylated ZAP-70 complex, and d) determining the amount of aminopyrido- pyrimidine ligand 24 - phosphorylated ZAP-70 complex formed in steps b) and c). In a forth aspect, the invention relates to a method for the identification of an ZAP-70 interacting compound, comprising the steps of: a) providing two aliquots comprising each at least one cell containing phosphorylated ZAP-70, b) incubating one aliquot with a given compound, c) harvesting the cells of each aliquot, d) lysing the cells in order to obtain protein preparations, e) contacting the protein preparations with aminopyrido-pyrimidine ligand 24 immobilized on a solid support under conditions allowing the formation of an aminopyrido-pyrimidine ligand 24 - phosphorylated ZAP-70 complex, and f) determining the amount of aminopyrido-pyrimidine ligand 24 - phosphorylated ZAP-70 complex formed in each aliquot in step e).
Un premier aspect de cette invention concerne un procédé pour identifier un composé interagissant avec la kinase ZAP-70, comprenant les étapes qui consistent : a) à fournir une préparation protéique comportant une ZAP-70 phosphorylée; b) à mettre en contact cette préparation avec le ligand aminopyrido-pyrimidine 24 qui est immobilisé sur un support solide, dans des conditions qui permettent la formation d'un complexe constitué du ligand aminopyrido-pyrimidine 24 et de la ZAP-70 phosphorylée; c) à incuber le complexe obtenu avec un composé donné; et d) à déterminer si le composé peut séparer la ZAP-70 phosphorylée du ligand aminopyrido-pyrimidine 24 immobilisé. Un deuxième aspect de cette invention concerne un procédé pour identifier un composé interagissant avec la kinase ZAP-70, comprenant les étapes qui consistent : a) à fournir une préparation protéique comportant une ZAP-70 phosphorylée; b) à mettre en contact cette préparation avec le ligand aminopyrido-pyrimidine 24 qui est immobilisé sur un support solide, et avec un composé donné, dans des conditions qui permettent la formation d'un complexe constitué du ligand aminopyrido-pyrimidine 24 et de la ZAP-70 phosphorylée; c) à détecter le complexe formé au cours de l'étape b). Un troisième aspect de cette invention concerne un procédé pour identifier un composé interagissant avec la kinase ZAP-70, comprenant les étapes qui consistent : a) à fournir deux aliquotes d'une préparation protéique comportant une KAP-70 phosphorylée; b) à mettre en contact une aliquote avec le ligand aminopyrido-pyrimidine 24 immobilisé sur un support solide, dans des conditions permettant la formation d'un complexe constitué du ligand aminopyrido-pyrimidine 24 et de la ZAP-70 phosphorylée; c) à mettre en contact l'autre aliquote avec le ligand aminopyrido-pyrimidine 24 immobilisé sur un support solide, et un composé donné, dans des conditions permettant la formation d'un complexe constitué du ligand aminopyrido-pyrimidine 24 et de la ZAP-70 phosphorylée; et d) à déterminer la quantité de complexe formée au cours des étapes b) et c). Un quatrième aspect de la présente invention concerne un procédé pour identifier un composé interagissant avec la kinase ZAP-70, comprenant les étapes qui consistent : a) à fournir deux aliquotes comportant respectivemment au moins une cellule renfermant la ZAP-70 phosphorylée; b) à incuber une aliquote avec un composé donné; c) à récolter les cellules de chaque quantité aliquote; d) à lyser ces cellules pour obtenir des préparations protéiques; e) à mettre en contact ces préparations avec le ligand aminopyrido-pyrimidine 24 qui est immobilisé sur un support solide, dans des conditions permettant la formation d'un complexe constitué du ligand aminopyrido-pyrimidine 24 immobilisé et de la ZAP-70 phosphorylée; et f) à déterminer la quantité de complexe formé dans chaque aliquote au cours de l'étape e).
Drewes Gerard
Eberhard Dirk
Kruse Ulrich
Ramsden Nigel
Bereskin & Parr Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
Cellzome Ag
LandOfFree
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