Methods for the preparation of nucleic acid and polypeptide...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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C12N 15/10 (2006.01) C07K 16/00 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 9/00 (2006.01) C12N 15/13 (2006.01) C12N 15/55 (2006.01)

Patent

CA 2350779

This invention provides novel methods of generating large, highly diverse, nucleic acid (and hence polypeptide) libraries. The methods exploit the discovery that recombination, particularly recombinase recombination can occur between two or more constructs of the same type (e.g. having the same origin of replication and/or the same regulatory or selectable markers). The methods thus involve introducing at least two members of an initial population of nucleic acid molecules into at least one cell under conditions were recombination (e.g recombinase mediated recombination) can occur between the nucleic acids. The nucleic acid molecules preferably comprise two or more individual nucleic acids each of which consists of a nucleic acid sequence that is identical for each molecule and that includes an origin of replication; and a nucleic acid sequence that varies between members of said population. Thus, a single type of construct is capable of mediates all of the recombination events providing substantially greater efficiency and the creation of substantially larger and more diverse nucleic acid libraries.

L'invention se rapporte à de nouvelles méthodes de création de grandes banques d'acides nucléiques (et par conséquent de polypeptides) très diversifiées. Ces méthodes sont fondées sur la découverte que la recombinaison, et notamment la recombinaison par recombinase, peut se produire entre au moins deux produits de recombinaison du même type (par exemple, ayant la même origine de réplication et/ou les mêmes marqueurs régulateurs ou sélectionnables). Ces méthodes consistent donc à introduire au moins deux éléments d'une population initiale d'acides nucléiques dans au moins une cellule, dans des conditions permettant une recombinaison entre les acides nucléiques (par exemple, une recombinaison à médiation assurée par une recombinase). Les molécules d'acides nucléiques comportent de préférence au moins deux acides nucléiques distincts constitués chacun d'une séquence nucléotidique qui est la même pour chaque molécule et qui comprend une origine de réplication, et d'une séquence d'acides nucléiques qui varie d'un élément à l'autre de ladite population. Ainsi, un seul type de produit de recombinaison est capable d'assurer la médiation de tous les événements de recombinaison, ce qui permet de créer des banques d'acides nucléiques sensiblement plus grandes et plus diversifiées et d'accroître sensiblement l'efficacité de création de telles banques.

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Profile ID: LFCA-PAI-O-1601961

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