Methods for the production of protein particles useful for...

A - Human Necessities – 61 – K

Patent

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A61K 9/14 (2006.01) A61K 9/16 (2006.01) A61K 9/50 (2006.01) A61K 9/51 (2006.01) A61K 31/70 (2006.01) A61K 38/00 (2006.01) A61K 38/38 (2006.01) A61K 47/02 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01) A61K 49/22 (2006.01)

Patent

CA 2263765

A method has been developed for the formation of submicron particles (nanoparticles) by heat-denaturation of proteins (such as human serum albumin) in the presence of multivalent ions (such as calcium). Also provided are novel products produced by the invention method. An appropriate concentration of multivalent ions, within a relatively narrow range of concentrations, induces the precipitation of protein in the form of colloidal particles, at a temperature which is well below the heat denaturation temperature of the protein (as low as 60 °C for serum albumin). Temperatures at which invention method operates are sufficiently low to permit incorporation of other molecules (e.g., by co-precipitation), into submicron particles according to the invention, including compounds which cannot withstand high temperatures. Invention methods facilitate the production of protein nanoparticles and microparticles containing various molecules (such as nucleic acids, oligonucleotides, polynucleotides, DNA, RNA, polysaccharides, ribozymes, pharmacologically active compounds, and the like) useful for therapeutic, diagnostic and other purposes. The addition of multivalent cations serves both to induce precipitation, and to allow linking of negatively charged molecules, such as DNA, to the negatively charged protein.

La présente invention concerne un procédé mis au point en vue de la formation de particules submicromies (nanoparticules) par dénaturation thermique de protéines (telles que l'albumine sérique humaine) en présence d'ions polyvalents (tels que du calcium). Elle concerne également des produits nouveaux élaborés par application dudit procédé. Une concentration appropriée d'ions polyvalents, compris dans une gamme relativement étroite de concentrations, entraîne la précipitation d'une protéine sous la forme de particules colloïdales, à une température bien inférieure à celle de la dénaturation thermique de la protéine (cette température pouvant aller jusqu'à 60 ·C dans le cas de l'albumine sérique). Les températures utilisées dans l'application dudit procédé sont suffisamment basses pour que d'autres molécules puissent être incorporées dans les particules submicromiques de la présente invention, y compris des composés ne supportant pas des températures élevées (cette incorporation se faisant par exemple, par coprécipitation). Ces procédés facilitent la production de nanoparticules et de microparticules contenant diverses molécules (telles que des acides nucléiques, des oligonucléotides, des polynucléotides, de l'ADN, de l'ARN, des polysaccharides, des ribozymes, des composés pharmacologiquement actifs, et d'autres composés similaires) utiles, notamment, à des fins thérapeutiques et diagnostiques. L'adjonction de cations polyvalents sert à la fois à induire la précipitation et à permettre la liaison de molécules à charge négative, telles que l'ADN, avec une protéine à charge négative.

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