Methods for the rapid detection of viable bacteria

G - Physics – 01 – N

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G01N 33/569 (2006.01) C12N 11/00 (2006.01) C12Q 1/04 (2006.01) G01N 33/543 (2006.01) G01N 33/564 (2006.01) G01N 33/58 (2006.01)

Patent

CA 2306211

The invention relates to methods for the rapid detection, including quantitative detection, of actively respiring microorganisms. One embodiment comprises the steps of amplifying the presence of microorganisms utilizing microbial enzymatic conversion of tetrazolium salts to formazan products, detecting the presence of formazan product utilizing specific antibodies raised to formazans and amplifying the presence of the primary antibody with a secondary antibody conjugated to a detectable marker. Another embodiment of the invention comprises the steps of amplifying the microorganisms utilizing microbial enzymatic conversion of tetrazolium salts to formazan products, capturing digested microbial cell fragments with immobilized primary antibodies specific to the formazans and amplifying the presence of captured cell fragments with reporter antibodies prepared from the primary antibodies conjugated to a detectable marker. Another embodiment of the invention comprises the steps of amplifying microorganisms utilizing microbial enzymatic conversion of tetrazolium salt to formazan products, capturing digested microbial cell fragments on primary antibodies immobilized onto a solid sensor support and detecting the presence of captured cell fragments by the measurement of a change in either the physical, chemical electrical or optical properties of the sensor material.

Cette invention concerne des procédés de détection rapide, y compris de détection quantitative, de micro-organismes à respiration active. Un mode de réalisation consiste à amplifier la présence de micro-organismes grâce à une conversion enzymatique microbienne de sels de tétrazolium en produits formazan; à déceler la présence de produit formazan grâce à des anticorps spécifiques dirigés contre les formazans; et à amplifier la présence de cet anticorps primaire au moyen d'un anticorps secondaire conjugué à un marqueur décelable. Un autre mode de réalisation consiste à amplifier les micro-organismes grâce à une conversion enzymatique microbienne de sels de tétrazolium en produits formazan; à capturer des fragments de cellules microbiennes digérés au moyen d'anticorps primaires immobilisés spécifiques des formazans; et à amplifier la présence de ces fragments cellulaires capturés au moyen d'anticorps marqueurs préparés à partir de ces anticorps primaires conjugués à un marqueur décelable. Un autre mode de réalisation consiste à amplifier les micro-organismes au moyen d'une conversion enzymatique microbienne de sels de tétrazolium en produits formazan; à capturer des fragments de cellules microbiennes digérés sur des anticorps primaires immobilisés sur un support capteur solide; et à déceler la présence de ces fragments cellulaires capturés grâce à la mesure d'une modification des propriétés physiques, chimiques, électriques ou optiques de ce matériau capteur.

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